Бесплатно скачать, заказать диплом, курсовую, диссертацию Липосомальные вакцины в промышленном птицев одств е

У нас уже 176407 рефератов, курсовых и дипломных работ

Сделать закладку на сайт

Заказать диплом, курсовую, диссертацию

Быстрый переход к готовым работам

Мнение посетителей:

Книга жалоб
и предложений

Название	Липосомальные вакцины в промышленном птицев одств е

Количество страниц	288

ВУЗ	МГИУ

Год сдачи	2010

Бесплатно Скачать	23002.doc

Содержание	Содержание -2-ОГЛАВЛЕНИЕ Стр. Список используемых сокращений... б ВВЕДЕНИЕ... 7 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ... 14 1.1. Краткая характеристика наиболее опасных вирусных болезней птиц 14 1.1.1. Ныокаслская болезнь... 14 1.1.2. Инфекционная бурсальная болезнь... 20 1.1.3. Инфекционный бронхит птиц... 29 1.1.4. Синдром снижения яйценоскости - 76... 37 1.2. Средства и методы специфической профилактики вирусных болезней 46 птиц... 1.3. Липосомы... 56 1.3.1. Характеристика липосом... 56 1.3.2. Строение, структура, свойства и способы приготовления липосом ... 57 1.3.3. Использование липосом для конструирования вакцин... 66 1.3.4. Методы введения липосом... 69 1.3.5. Использование липосом в качестве иммунологических адъювантов в 78 птицеводстве... 1.4. Фармакокоррекция стрессов и иммунодефицитных состояний... 82 1.4.1 .Фармакологическая характеристика этимизола... 92 2.0. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ... 95 2.1. Материалы и методы исследований... 95 2.1.1. Используемые животные и эмбрионы... 95 2.1.2. Характеристика использованных в работе штаммов вирусов... 95 2.1.3. Методы проведения диагностических исследований... 96 2.1.3.1.Определение антигенной активности вируса НБ... 96 2.1.3.2.Определение антигенной активности вируса ИБК... 97 2.1.3.3.Определение антигенной активности вируса ИББ... 97 2.1.3.4. Определение антигенной активности вируса ССЯ- 76... 97 2.1.3.5. Ретроспективный эпизоотологический анализ... 97 -3- 2.1.4. Получение липосом... 97 2.1.5. Контроль качества липосом... 98 2.1.6. Методы получения и контроля лабораторных серий инактивирован- 103 ной вакцины... 2.1.6.1. Определение стерильности... 103 2.1.6.2. Определение полноты инактивации вирусов ИБК, ИББ, НБ и 104 ССЯ-76... 2.1.6.3. Безвредность, иммуногенная и антигенная активность вакцины ... 107 2.1.6.4. Определение размеров и содержимого липосом... 108 2.1.6.5. Стабильность вакцины... 108 2.1.6.6. Определение коэффициента включения вирусов в липосомы... 108 2.1.7. Статистический анализ результатов... 111 :2.2. Использование липосом при разработке вакцины... 112 2.2.1. Ретроспективный эпизоотологический анализ распространения НБ, 112 ИББ, ССЯ-76, ИБК и в Российской Федерации... 2.2.2. Технологический регламент изготовления инактивированных, моно- 118 валентных и ассоциированных липосомальных вакцин против ССЯ-76, НБ,ИББиИБК... 2.2.2.1. Технологический регламент изготовления липосом... 120 2.2.2.1.1. Сведения о приборах, используемых при получении и контроле 120 липосом... 2.2.2.1.2. Биохимическая характеристика исходного сырья для получения 121 липосом... 2.2.2.1.3. Получение мультиламелярных везикул... 124 2.2.2.1.3. 1. Получение жидких липосом... 124 2.2.2.1.3. 2. Получение сухих липосом... 126 2.2.2.1.3. 3. Стабилизация и стерилизация липосом... 128 2.2.2.1.3.4. Контроль качества липосом и их физико-химических и 129 биологических свойств... 2.2.2.1.3. 5. Определение токсичности липосом... 132 2.2.3. Изучение механизма взаимодействия липосом с клетками (фагоцитоз 134 -4- липосом макрофагами)... 2.2.4. Технологический регламент изготовления сухой и жидкой форм 138 инактивированных липосомальных моновалентных вакцин против ССЯ-76, НБ, ИББ, ИБК... 2.2АЛ. Экспериментальные исследования липосомальной моновалентной 143 вакцины против ССЯ-76 на безвредность, антигенную и иммуногенную активность, стабильность... 2.2.4.2. Экспериментальные исследования липосомальной моновалентной 152 вакцины против НБ на безвредность, антигенную и иммуногенную активность, стабильность... 2.2.4.3. Экспериментальные исследования липосомальной моновалентной 160 вакцины против ИББ на безвредность, антигенную и иммуногенную активность, стабильность... 2.2.4.4. Экспериментальные исследования липосомальной моновалентной 168 вакцины против ИБК на безвредность, антигенную и иммуногенную активность, стабильность... 2.2.4.5. Разработка технологического регламента изготовления ассоции- 175 рованной инактивированной липосомальной вакцины против ССЯ-76, НБ, ИББ и ИБК... 2.2.4.6. Лабораторный технологический регламент изготовления инакти- 183 вированной, липосомальной вакцины против НБ, ИББ, ИБК и ССЯ-76... 2.2.4.7. Лабораторный регламент биологического контроля инактивирован- 190 ной, липосомальной вакцины против НБ, ИББ, ИБК и ССЯ-76.. 2.3. Стресспротективные, иммуностимулирующие свойства и токсико- 198 биологическая оценка этимизола... 2.3.1. Стресспротективные свойства этимизола... 198 2.3.2. Иммуностимулирующие свойства этимизола... 203 2.3.3. Токсико-биологическая оценка этимизола... 213 2.4 . Испытание экспериментальных серий вакцинных композиций в 218 лабораторных и производственных условиях... -5- 3.0. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ... 221 ВЫВОДЫ... 241 ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ... 243 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ... 245 ПРИЛОЖЕНИЯ... 288 Введение Список использованных сокращений ББ - ньюкаслская болезнь ИББ — инфекционная бурсальная болезнь ИБК - инфекционный бронхит кур ССЯ-76 - синдром снижения яйценоскости - 76 ИФА - иммуноферментный анализ ПНР - полимеразная цепная реакция РН - реакция нейтрализации РДП - реакция диффузной преципитации МЛВ - мультиламелярные везикулы MOB - малые одноламелярные везикулы БОВ - большие одноламелярные везикулы ФХ - фосфатидилхолин ЖПНК - жирные полиненасыщенные кислоты ГОА - гидроокись алюминия БЭО - бис-р-этилениминоэтилоксамид -7- ВВЕДЕНИЕ Актуальность проблемы. В комплексе мер борьбы с инфекционными заболеваниями, включающими соблюдение ветеринарно-санитарных правил, условий содержания и кормления, вакцинопрофилактика занимает ведущее место. Применение живых и инактивированных вакцин обеспечивает надежную защиту птиц от ньюкаслской болезни, инфекционного бронхита кур, синдрома снижения яйценоскости-76, инфекционной бурсальной болезни и других инфекций [6, 21, 120,134,146,314,340,363]. Широко используется метод ассоциированной вакцинации птиц инактивированными, масляно-эмульсионными вакцинами [104, 185, 380]. Считается, что безопасность инактивированных вакцин достаточно гарантирована. Однако при их парентеральном применении возможно появление общей и местной воспалительной реакции на месте введения с последующим развитием локальных абсцессов и гранулем [82, 236, 453]; гиперсенсибилизация организма и активация аутоиммунных процессов. Поэтому не случаен поиск нетрадиционных способов решения проблем иммунизации птиц, улучшения способа доставки антигена и обеспечения большего удобства при применении. Актуальной остается разработка оптимальных лекарственных форм, позволяющих полностью снять негативные эффекты, наблюдаемые после введения препаратов. Известно, что применение инактивированных вакцин другими методами, в частности энтеральным, мало эффективно. И, тем не менее, интерес у исследователей к не парентеральным методам вакцинации не снижался. Поэтому успех, достигнутый в этом направлении, не случаен. Учеными НИИ гриппа РАМН, ГНЦ ГосНИИОЧБ, НИИЭМ им.Л.Пастера (г.Санкт-Петербург) успешно осуществлено создание сухой, липосомальной, инактивированной вакцины для1 перорального применения против гриппа человека [67, 68, 159]. Использование в работе липосомальных технологий, широко применяемых в разных областях медицины, позволило открыть новое, перспективное направление в науке, позволяющее конструировать лекарственные формы вакцин на основе наночастиц [55]. -8- Липосомы (от греческого липос - жир и сома - тельце или частица) - это замкнутые многослойные макроструктуры, состоящие из концентрических липидных бислоев, разделенных изолированными водными промежутками. Они широко используются как модельная система, воспроизводящая многие свойства биологических мембран [92]. Одним из важных свойств липосом является способность включать и удерживать в себе те вещества, которые содержатся в окружающей их среде. Это могут быть как неорганические ионы, так и крупные белки, вирусы, бактерии. Например, включенные в готовые липосомы путем простой инкубации альбумин, инсулин, и иммуноглобулины оставались связанными с липосомами даже после гель-фильтрации, что свидетельствует о прочной связи между ними [331, 456, 457]. Кроме роли хранилища, из которого препарат высвобождается постепенно, с определенной скоростью, липосомы могут использоваться как переносчики лекарственных препаратов, в том числе антигенов [55, 57, 163]. Поэтому не случайно в научной литературе часто встречаются такие названия липосом, как "конверто-подобные структуры", "сейфы" для хранения, "контейнеры" для доставки биологических субстанций. Многочисленные клинические испытания липосомальных препаратов, показали их безопасность для организмов животных и человека. Учитывая, что в настоящее время на мировом рынке уже появилось более десяти тысяч липосомальных препаратов, в том числе вакцин (против ньюкаелской болезни и реовирусной инфекции - лицензия США; вакцина против ИЛТ - Россия и др.) и не меньшее количество находится на различных стадиях клинических испытаний - мы поставили перед собой цель создание липосомальных инактивированных вакцин, как актуальную и представляющую интерес и для науки, и для отечественного промышленного птицеводства. Однако следует учитывать, что эффективность вакцинопрофилактики зависит не только от качества вакцины, но и от состояния иммунной системы птицы. Часто действующие стресс-факторы, в том числе перегруппировка в 120 дневном возрасте, оказывают негативное влияние на ее функциональную активность. -9- Поэтому поиск стресспротективных препаратов и введение их в состав вакцинных композиций - одна из задач науки и практики, решение которой открывает новые пути к более эффективной профилактике многих заболеваний [61]. Цель и задачи исследований. Цель исследований - разработать новые средства специфической профилактики наиболее распространенных вирусных болезней птиц и предложить комплексные вакцинирующие композиции имеющие в своем составе вещества обладающие стресспротективным и иммуностимулирующим эффектом. В соответствии с этим были поставлены следующие задачи: - разработать четыре моновалентные липосомальные вакцины против НБ, ИББ,ИБКиССЯ-76; - разработать ассоциированную форму вакцины против НБ, ИББ, ИБК и ССЯ-76; - разработать альтернативную форму применения указанных вакцин: сухую -для энтерального введения; - изучить влияние этимизола на биохимические и иммунобиологические показатели крови цыплят при стрессе и его иммуностимулирующие свойства, ввести его в состав вакцины; - разработать технологическую схему приготовления указанных вакцин и подобрать методики контроля и схемы применения; - испытать вакцинные композиции в лабораторных и производственных условиях; - разработать научно-техническую документацию на опытно-промышленное производство вакцины. Научная новизна работы. Впервые разработана липосомальная инактивированная вакцина против НБ, ИББ, ИБК, ССЯ-76, отличающаяся формой выпуска и новым способом введения. Разработан метод получения сухого вакцинного препарата выполненного в виде микрогранул, внутренняя часть которых содержит липосомальную везикулу с антигеном. -10- Разработан технологический регламент производства вакцин и методы контроля их качества. Проведено сравнительное изучение иммунобиологических свойств вакцин при разных способах введения (энтеральном, внутримышечном и подкожном). Научно обоснованы и экспериментально подтверждены иммунизирующие дозы, способы введения и схемы применения вакцин. Предложены комплексные вакцинирующие композиции, имеющие в своем составе этимизол, обладающий стресспротективным и иммуностимулирующим эффектом. Практическая ценность работы. Результаты исследований, изложенные в диссертации, использованы для разработки: - шактивована лшосомальна вакцина "ЛШОСОМВАК" (моноваленп та асощйоваш форми) проти ньюкаслсько1 хвороби, шфекцшного бронхпу курей, шфекщйно1 бурсально1 хвороби, синдрому знижения яйценоскосп-76, техшчш умови утверждени Мшютерством arpapHoi полггики Украшы (ТУ У24.4.24792 862.597 - 2001); - настанова по застосуванню шактивовано1 лшосомально1 вакцини "ЛШОСОМВАК" (моновалент1 та асощйоваш форми) проти ньюкаслсько1 хвороби, шфекцшного бронхпу курей, шфекц1йно1 бурсально! хвороби, синдрому знижения яйценоскость76, утверждени 21.09.2001 г. Державшм департаментом ветеринарно! медицини; - наставление по профилактике транспортного стресса у цыплят с помощью аэрозолей этимизола, утвержденных ГУВ Госагропрома СССР 5 сентября 1988 года. - инструкции по изготовлению и контролю сухой формы липосомальной, инактивированной вакцины против ССЯ-76, НБ, ИББ и ИБК (утверждена ректором СПбГАВМ 10.01.01г.); - инструкции по изготовлению и контролю жидкой формы липосомальной, инактивированной вакцины против ССЯ-76, НБ, ИББ и ИБК (утверждена ректором СПбГАВМ 10.01.01 г.); -11 - - методических рекомендаций по изготовлению ксеногенных сывороток к Т- и В-лимфоцитам птиц (утверждено на методическом совете СПбГАВМ, протокол № 1, от 20.11.2002 г.); - технических условий на сухую и жидкую формы липосомальной, инактивированной вакцины "ЛИПОСОМВАК" против ССЯ-76, НБ, ИББ и ИБК (находятся на рассмотрении в Департаменте ветеринарии МСХиП РФ); - наставления по применению сухой и жидкой формы липосомальной, инактивированной вакцины "ЛИПОСОМВАК" против ССЯ-76, НБ, ИББ и ИБК (находятся на рассмотрении в Департаменте ветеринарии МСХиП РФ). Основные положения, выносимые на защиту. 1. Создание нового класса вакцин для специфической профилактики особо опасных вирусных болезней птиц (НБ, ИББ, ИБК и ССЯ-76): - технологический регламент производства липосомальных инактивированных вакцин; - сравнительное изучение иммунобиологических свойств вакцин при разных способах введения (энтеральном, внутримышечном, подкожном). 2. Создание вакцинных композиций включающих препарат, обладающий стресс-протективным и иммуностимулирующим эффектом. Апробация работы. Основные материалы диссертации доложены и обсуждены на научно-производственной конференции молодых ученых и аспирантов Всесоюзного НИВИ птицеводства (1984 г.); Всесоюзной научно-производственной конференции "Система мероприятий по обеспечению эпизоотического благополучия и рентабельности птицеводческих предприятий" (г.Ломоносов, 1985г.); методическом и ученом советах Всесоюзного НИВИ птицеводства (1986г.); на научной конференции "Современные средства и методы борьбы с заразными болезнями с/х птиц" (Ленинград, 1987 г.); на 1-ой межвузовской науч.-практ. конф. "Новые фармакологические средства в ветеринарии" (Ленинград, 1989 г.); научной конференции "Современные методы исследований в животноводстве и птицеводстве" (Ленинград, 1989 г.); научной конференции "Комплексная система ветеринарных мероприятий в птицеводстве - резерв повышения -12- эффективности производства" (г.Ломоносов, 1989 г.); научной конференции "Фармакология и токсикология новых лекарственных средств и кормовых добавок в ветеринарии" (Ленинград, 1989 г.); на международной конференции, посвященной 30-летию Всероссийского научно-исследовательского ветеринарного института патологии, фармакологии и терапии "Теоретические и практические аспекты возникновения и развития болезней животных и защита их здоровья в современных условиях" (Воронеж, 2000 г.), 25 международной научно-практической конференции "Новые фармакологические средства в ветеринарии", посвященной 300-летию Санкт-Петербурга (С.-Петербург, 2003 г.); IV Украшско1 конференцп по птах1вництву з м1жнародною участю (Харюв, 2003 г.); межвузовской научной конференции профессорско-преподавательского состава, научных сотрудников и аспирантов Санкт-Петербургской государственной академии ветеринарной медицины (2001г., 2002 г., 2003 г., 2004 г.). Публикации. По теме диссертации опубликовано 32 работы, в том числе 2 монографии, получено 3 авторских свидетельства и 2 патента, в которых изложено основное ее содержание. Объем и структура работы. Диссертация изложена на 287 страницах и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, выводов, практических предложений и приложения. Содержит 42 таблицы, 16 рисунков и 13 фотоснимков. Список использованной литературы содержит 476 наименований работ отечественных и зарубежных авторов, в том числе отечественных - 137, иностранных - 339. В приложении представлены копии документов, подтверждающих достоверность результатов работы, ее научную и практическую значимость. Пользуясь случаем, автор сердечно благодарит научного консультанта профессора В.Д.Соколова, академика РАСХН Р.Н.Коровина, профессора А.И.Гинака за неоценимую помощь при выполнении диссертации, и всех кто оказывал помощь в организации и проведении исследований по теме работы, а также сотрудников, которые перечислены в качестве соавторов в списке публикаций по теме диссертации. -13- В выполнении раздела электронно-микроскопических исследований принимали участие и оказывали практическую и консультативную помощь сотрудники НИИ гриппа РАМН Сухинин В.П., Сироткин А.К., за что приносим им искреннюю благодарность.

Список литературы

Цена, в рублях: (при оплате в другой валюте, пересчет по курсу центрального банка на день оплаты)	1425

Скачать бесплатно	23002.doc

Найти готовую работу

ЗАКАЗАТЬ

Обратная связь:

Связаться

Вход для партнеров

Регистрация

Восстановить доступ

Материал для курсовых и дипломных работ

15.04.24 Задачи, условия и этапы организации экспериментальной работы

15.04.24 Критерии качества преподавания

15.04.24 Категория нормы в обучающей деятельности

Архив материала для курсовых и дипломных работ

Ссылки:

Счетчики:

© 2006-2022. Все права защищены.
Выполнение уникальных качественных работ - от эссе и реферата до диссертации. Заказ готовых, сдававшихся ранее работ.