Бесплатно скачать, заказать диплом, курсовую, диссертацию Гормональная регуляция прогамной фазы оплодотворения у петунииГормональная регуляция прогамной фазы оплодотворения у петунии

У нас уже 176407 рефератов, курсовых и дипломных работ

Сделать закладку на сайт

Заказать диплом, курсовую, диссертацию

Быстрый переход к готовым работам

Мнение посетителей:

Книга жалоб
и предложений

Название	Гормональная регуляция прогамной фазы оплодотворения у петунииГормональная регуляция прогамной фазы оплодотворения у петунии

Количество страниц	100

ВУЗ	МГИУ

Год сдачи	2010

Бесплатно Скачать	24770.doc

Содержание	Содержание ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ...5 ГЛАВА 1. ПРОРАСТАНИЕ И РОСТ МУЖСКОГО ГАМЕТОФИТА В ПРОГАМНОЙ ФАЗЕ ОПЛОДОТВОРЕНИЯ У ВЫСШИХ РАСТЕНИЙ (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ) ...7 1.1. Мужской гаметофит...7 1.2. Адгезия пыльцевых зерен...8 1.3. Гидратация пыльцевых зерен...11 1.4. Прорастание мужского гаметофита...14 1.5. Пыльцевая трубка ...16 1.6. Рост пыльцевых трубок...20 1.7. Факторы регуляции прорастания и роста мужского гаметофита:...23 1.7.1. белки...23 1.7.2. роль ионов Са 2+, Н+, К+, СГ...27 1.7.2.1. Са2+...28 1.7.2.2. Н*...31 1.7.2.3. К+и СГ...34 1.7. 3. фитогормоны...38 1.8. Цель работы...41 ГЛАВА 2. ОБЪЕКТ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ ...43 2.1. Объекты исследования...43 3 2.2. Вегетативное размножение клонов петунии...44 2.3. Определение содержания АЦК...44 2.4. Определение активности АЦК-оксидазы in vitro...45 2.5. Определение активности АЦК-синтазы in vitro...46 2.6. Регистрация мембранного потенциала пыльцевых зерен.46 2.7. Оценка цитоплазматического рН пыльцевых зерен...47 2.8. Регистрация Са2+ -поглощающей способности пыльцевых зерен...48 ГЛАВА 3. ВЛИЯНИЕ ЭКЗОГЕННЫХ ФИТОГОРМОНОВ НА НЕКОТОРЫЕ ПАРАМЕТРЫ ИОННОГО ГОМЕОСТАЗА ГИДРАТИРОВАННЫХ ПЫЛЬЦЕВЫХ ЗЕРЕН ПЕТУНРШ...51 3.1. Гормон-индуцируемые изменения цитоплазматического рН...52 3.2. Действие экзогенных фитогормонов и ионов К+ на мембранный потенциал плазмалеммы...60 3.2. Тестирование поведения экзогенных фитогормонов как факторов, обеспечивающих открывание Са 2+ каналов в плазмалемме пыльцевых зерен, ответственных за поглощение ими внеклеточного кальция...68 ГЛАВА 4. ЭТИЛЕН - ФАКТОР ПРОРАСТАНИЯ И РОСТА 4 МУЖСКОГО ГАМЕТОФИТА В ПРОГАМНОЙ ФАЗЕ ОПЛОДОТВОРЕНИЯ...70 4.1. Активность АЦК-синтазы в тканях пестика и его частях (рыльце, столбике и завязи) петунии двух клонов после самосовместимого и самонесовместимого опыления...72 4.2. Динамика содержания АЦК в системе пыльца-пестик петунии двух клонов (самосовместимого и самонесовместимого) после опылений...74 4.3. Активность АЦК-оксидазы в системе пыльца-пестик петунии после самоопыления...81 4.4. Динамика выделения этилена тканями рыльца петунии двух клонов после самоопыления и перекрестного опыления...81 ГЛАВА 5. ОСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ...85 ЗАКЛЮЧЕНИЕ...95 ВЫВОДЫ...98 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ...100 Введение Щ ВВЕДЕНИЕ В репродуктивном процессе растений ключевую роль играет прогамная фаза оплодотворения, во время которой гаплоидный мужской гаметофит (пыльцевое зерно или пыльцевая трубка) взаимодействует с диплоидными спорофитными тканями пестика. Межклеточные взаимодействия в системе пыльца-пестик начинаются с попадания пыльцы на рыльце, продолжаются во время роста пыльцевых трубок по % проводниковому тракту (межклеточное пространство проводниковых тканей или открытый канал столбика) и завершаются слиянием гамет в завязи. В этот сложный процесс вовлечено множество взаимодействий, включая клеточное узнавание, вне- и внутриклеточную сигнализацию и другие, пока неисследованные события. Изучение механизмов взаимодействия мужского гаметофита со спорофитными тканями пестика, которые в значительной степени определяют возможность Щ' последующего слияния гамет при совместимом опылении или ее невозможность при наличии генетически детерминированных барьеров оплодотворения, актуально для фундаментальных исследований фертильности и репродукции растений. Система пыльца-пестик представляет интерес в качестве модельной системы для изучения полярного роста, межклеточных взаимодействий и сигнальной трансдукции. К настоящему времени достигнут значительный прогресс в '% понимании многих процессов, вовлеченных в регуляцию роста пыльцевых трубок (Бритиков, 1957; Stanley & Linskens, 1974; Cresti & Went, 1976; Clarke & Gleeson, 1981; Knox, 1984; Ferrary et al, 1985; Zuberi & Dickinson, 1985; Bedinger, 1992; Cheung et al, 1993; Mascarenhas, 1993; Pierson et al, 1994; Derksen et al, 1995; Feijo et al, 1995; Cheung, 1996; Malho & Trewavas, 1996; Wolters-Arts et al, 1996; Luu et al, 1997; Taylor & Hepler, 1997; Franklin-Tong, 1999; Li et al, 1999; Pruitt, 1999; Nasrallah, 2000; Geitmann et al, 2000; Русаковская и Блинцов, 2001; Graaf et al, 2001; Lord & Russel, 2002; Lord, 2003; Cheung et al, 2003). Однако молекулярная основа межклеточных взаимодействий в системе пыльца-пестик пока не изучена. Данная работа представляет собой одну из первых работ, направленных на решение проблемы, касающейся участия гормонов в межклеточных взаимодействиях в прогамной фазе оплодотворения. ГЛАВА 1. ПРОРАСТАНИЕ И РОСТ МУЖСКОГО ГАМЕТОФИТА В ПРОГАМНОЙ ФАЗЕ ОПЛОДОТВОРЕНИЯ У ВЫСШИХ РАСТЕНИЙ (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ) Опыление - одно из ключевых событий репродуктивного процесса растений. Пыльцевое зерно (мужской гаметофит), основная функция которого состоит в доставке двух мужских гамет к зародышевому мешку, попадает на воспринимающую поверхность рыльца пестика, где происходят его адгезия и гидратация, а затем прорастание и рост пыльцевой трубки в проводниковых тканях столбика и завязи. 1.1. Мужской гаметофит Пыльцевое зерно - изолированная клеточная система (зрелое пыльцевое зерно образовано двумя или тремя клетками) - формируется в процессе микроспорогенеза в процессе двух циклов клеточного деления. Мужские гаметы (спермин) или их предшественница -генеративная клетка - располагаются в толще цитоплазмы вегетативной клетки, которая по мере созревания пыльцы дегидратируется и заполняется запасными веществами. Ядро вегетативной клетки контролирует рост и метаболизм пыльцевой трубки (Нокс, 1990). Структура и метаболизм рыльца, приспособленные к восприятию пыльцы, обеспечивают условия для ее адгезии, гидратации и прорастания, обеспечивая осмотический баланс и достаточное снабжение водой и питательными веществами (Кпох, 1984). 1.2. Адгезия пыльцевых зерен Адгезия - фундаментальное свойство всех клеток, именно адгезия инициирует процесс межклеточного узнавания. Адгезия пыльцевых зерен как первый этап взаимодействия пыльцы и рыльца обусловлена высокой вязкостью и клейкостью экссудата рыльца (Konar & Linskens, 1966). Факторами, влияющими на процесс адгезии, являются поверхностное натяжение, сила ветра, электростатическая сила, электродинамическая сила и сила притяжения. Прилипание определяется главным образом степенью влажности пыльцы и рыльца, скорость процесса не зависит ни от состава экссудата, ни от массы и морфологии пыльцы (Heslop-Harrison, 1987). Поверхность рыльца у представителей семейств Solanaceae и Leguminosae, которые имеют влажное рыльце, по-видимому, стимулирует адгезию пыльцы большей части видов, в то время как для представителей из семейства Brassicaceae, имеющих сухие рыльца, вероятно, очень важен механизм регуляции адгезии (Zinkl & Preuss, 2000). Анализ компонентов пыльцы и пестика гладиолуса позволил авторам идентифицировать те соединения, которые могут проявлять Щ' адгезивные свойства: арабиногалактаны, моносахариды, гликопротеины и гликолипиды (Clarke et al, 1979). В системе пыльца-рыльце Brassica oleracea были выявлены четыре типа межклеточного связывания (Ferrary et al, 1985). Сразу после контакта пыльцы с папиллами осуществляется первичное связывание, которое наблюдается как в случае совместимого, так и несовместимого опыления. Вторичное связывание происходит через 15 мин после контакта только в случае совместимого опыления и продолжается в течение 90 мин до выхода пыльцевых трубок. Следующий тип связывания, включающий контакт пыльцевой трубки с кутикулой, наблюдали только в случае несовместимого опыления. Последний тип связывания происходит между растущей пыльцевой трубкой и поверхностью папиллы, адгезия которых, по мнению авторов, является ферментативно регулируемым процессом липидной полимеризации (Ferrary et al, 1985). По мнению других авторов адгезия пыльцевых зерен обусловлена агглютинацией с участием гликопротеинов или лектинов (Clarke & Gleeson, 1981). Оболочка (трифина) пыльцевых зерен в семействе Brassicaceae содержит липидные компоненты, которые включаются в контроль межклеточных взаимодействий в системе пыльца-рыльце (Preuss et al 1993). 10 Щ1 Изучение адгезии у Arapidopsis thaliana, Brassica oleraceae, B.rapa показало, что рыльца A. thaliana селективно более активно связывают пыльцу A. thaliana по сравнению с пыльцой других близко родственных видов (Zinkl & Preuss, 2000). Генетический скрининг пестиков растений с мужской стерильностью позволил авторам выделить несколько lap (less adherent pollen) мутантов со сниженной адгезией пыльцы (Zinkl & Preuss, 2000). jjjf' Выявленные у мутанта lapl дефекты экзины позволили сделать авторам вывод о том, что оболочка пыльцы является существенным фактором ее адгезии. Однако, поскольку у этого мутанта не обнаружили снижения фертильности, заключили, что процесс адгезии не связан с последующими процессами гидратации и прорастания пыльцевых зерен. В рыльцах Brassica (с использованием трансгенных линий) выявлены два гликопротеина SLG (S-locus glycoprotein) и SLR1 (S locus W related protein), которые участвуют в адгезии пыльцевых зерен (Luu et al., 1999). Оба белка взаимодействуют in vitro с белками оболочки пыльцы (PCPs), цистеин-богатыми белками, которые экспрессируются в гаметофите (Doughty et al, 1993). Предполагают, что подобные взаимодействия белков могут иметь место также и ш vivo . У лилии исследована адгезия между пыльцевыми трубками, а также между пыльцевыми трубками и эпидермисом проводникового тракта столбика (Park et al., 2000; Lord, 2003). Исследование адгезии пыльцевых 11 трубок и матрикса столбика в культуре in vitro позволило авторам выявить в рыльце и столбике два соединения, связанные с адгезией: специфический полисахарид и цистеин-богатый белок SCA {stigma/stylar cystein-rich adhesiri). Адгезию удавалось предотвратить при помощи обработок пектина - полигалактуроназой, a SCA -протеинкиназой К. Хотя SCA не синтезируется в пыльце, она связывала его как in vivo, так и in vitro. 1.3. Гидратация пыльцевых зерен Пыльца, во время последнего периода созревания в тканях пыльника, подвергается быстрой дегидратации, поэтому мужской гаметофит характеризуется низким, по сравнению с соматическими клетками, содержанием воды, что отражается на характере его метаболизма и структурной организации, в частности, в более низкой m скорости дыхания и белкового синтеза (Цингер & Петровская-Баранова, 1961; Heslop-Harrison, 1979; Hoekstra & Bruinsma, 1979; Mascarenhas, 1975; Карпова, 1985). Поэтому успешное прорастание пыльцы и образование пыльцевой трубки как in vivo, так и in vitro зависит от хорошо сбалансированного и видоспецифичного водного запаса пыльцы (Linskens, 1981; Kranz & Lorz, 1990). Процесс гидратации пыльцевых зерен исследован еще слабее, чем их адгезия. 12 Разнообразная природа экссудата рылец у представителей различных семейств покрытосеменных наводит на мысль о существовании у них различных механизмов гидратации, однако во всех случаях ее результатом является реорганизация вегетативной клетки (Heslop-Harrison & Heslop-Harrison, 1992). У видов с влажными рыльцами, таких как Lilium, экссудат содержит большое количество воды и служит благоприятной средой для прорастания пыльцы. Однако у этих видов пыльца покрыта липидным слоем (Heslop-Harrison, 1968) и показано, что эти липиды играют важную роль в гидратации пыльцы и проникновении ее в ткани рыльца. Длинноцепочечные молекулы липидов в оболочке пыльцы Arabidopsis также вовлечены, как полагают, в последующий процесс гидратации пыльцы (Preuss et al., 1993; Hulskamp et al., 1995; Pruitt, 1997; Wilhelmi & Preuss, 1999). Липидная компонента экссудата влажного рыльца играет существенную роль в процессе полярного роста пыльцевой трубки в тканях столбика у Petunia (Wolters-Arts et al., 1998). Предполагают, что длинноцепочечные липиды могут действовать в качестве сигнала к инициации гидратации, но не ясно, играют ли они какую-либо роль в сохранении запаса воды в рыльце, что представляется существенным фактором для проникновения и продвижения пыльцевых трубок в тканях пестика. 13 На поверхности влажного рыльца пыльца сразу же попадает в жидкий матрикс или оводняется после разрыва кутикулы и высвобождения секрета рыльца (Heslop-Harrison & Heslop-Harrison, 1981). Если секрет содержит воду (или представляет водно-липидную эмульсию), гидратация пыльцы начинается немедленно. У видов с сухим рыльцем, воспринимающая поверхность которого покрыта белковой пеликуллой, содержащей липидные компоненты, нет готового источника воды для гидратации пыльцевых зерен, что создает значительный барьер для прорастания мужского гаметофита (Pruitt, 1999). В этом случае пыльца прикрепляется к пелликуле (Mattsson et al, 1974). Именно контрастными условиями прорастания пыльцевых зерен на рыльцах сухого и влажного типов, очевидно, можно объяснить различную способность пыльцы различных видов прорастать на искусственной среде. Так, пыльца растений, обладающих рыльцами влажного типа, прорастает легко в водной среде с подходящим осмотическим потенциалом, тогда как пыльца растений с рыльцами сухого типа часто требует особых условий для достижения необходимой для прорастания скорости гидратации (Bar-Shalom & Mattsson, 1977). Гидратация пыльцы во время ее начального контакта с папиллой рыльца является критической стадией в прохождении 14 самонесовместимости у рапса (Kandasamy et al., 1993; Dickinson, 1995; Ikedaetal., 1997). Основным прорывом в изучении компонентов, которые могут регулировать водный поток к пыльцевым зернам во время их гидратации, стала идентификация аквапоринов, белков водных каналов (Ikeda et al., 1997; Chrispeels et al., 1999). Аквапорины - белки плазмалеммы, представлены тетрамерами (субъединица-27 KDa), при этом полагают, что каждый из полипептидов образует водный канал. 1.4. Прорастание мужского гаметофита В процессе гидратации пыльцевые зерна набухают, при этом происходит реорганизация цитоплазмы и ее метаболизма, возрастает гидростатическое давление, которое приводит к открыванию апертуры пыльцевого зерна. Предполагают, что в месте появления пыльцевой трубки целостность интины нарушается вследствие активации ферментов (Makinen & Brewbaker, 1967; Knox & Heslop-Harrison, 1969; 1970). Общий объем пыльцевого зерна варьирует между отдельными видами, но у всех изученных видов максимальный объем пыльцевого зерна наблюдали при появлении пыльцевой трубки (Heslop-Harrison, 1987). При набухании и прорастании пыльцевой трубки быстро появляется каллозный слой (Ferguson et al., 1998). 15 У некоторых видов растений, в частности табака, прорастанию пыльцы предшествует активация белкового синтеза (Capkova-Balatkova et al., 1980), а также фосфорилирование белков (Wilson et al., 1997, Obermeyer et al., 1998). Доказано, что мРНК, необходимые для прорастания пыльцевой трубки, уже имеются в зрелой пыльце (Mascarenhas, 1990; Taylor & Hepler, 1997). Предполагается, что запасенная в процессе развития пыльцевого зерна мРНК транслируется на полирибосомах, которые формируются во время гидратации пыльцевого зерна (Taylor & Hepler, 1997). Одновременно с этим в процессе гидратации активируются дыхание и окислительное фосфорилирование (Hoekstra & Brainsma, 1979). Получены данные об участии липидов рыльца петунии и табака в гидратации пыльцы (Wolters-Arts et al., 1998). Полагают, что липиды, контролируя поток воды к пыльцевым зернам, регулируют их прорастание. Основными компонентами гидрофобного экссудата рыльца являются триглицериды (С 18) (Cresti et al, 1986). Постулируется, что гидрофобность экссудата является критическим фактором для прорастания пыльцевых зерен в тканях рыльца. Генов, экспрессирующихся при прорастании мужского гаметофита, выявлено пока очень мало. В частности, выявлены восемь новых генов, экспрессирующихся в первые полчаса при флавонол-индуцируемом прорастании пыльцы петунии (Guyon et al, 2000). 16 1.5. Пыльцевая трубка Пыльцевая трубка формируется из вегетативной клетки и растет своим кончиком (верхушечный рост). Диктиосомы производят секреторные везикулы, сливающиеся с мембраной кончика пыльцевой трубки, что ведет к ее удлинению (Steer & Steer, 1989; Pierson & Cresti, 1992; Derksen et al., 1995; Li et al., 1997). Секреторные везикулы активно транспортируются к кончику с помощью актинового цитоскелета. Формирование пыльцевой трубки сопровождается образованием зоны роста, вакуолизацией и активным движением цитоплазмы (Yang, 2002). Зона роста занимает тонкий слой в кончике трубки и содержит много органелл, главным образом пузырьков диктиосом. Стенка пыльцевой трубки состоит из одного наружного пектинового слоя и внутреннего каллозного слоя, который, например, у лилии возникает из цитоплазматических полисахаридных частиц (Miki-Hirosige & Nakamura, 1982). Следующую зону, в которой находятся ядро вегетативной клетки и генеративная клетка или спермин, характеризует присутствие вакуолей. Вакуоли формируются из пузырьков вторичного типа, они имеют нормальный тонопласт. Остальная часть пыльцевой трубки содержит большую вакуоль, окруженную тонким слоем цитоплазмы. Установлено, что за движение цитоплазмы в пыльцевой трубке ответственна его актин-миозиновая система (Shimmen et al, 2000). 17 Актин принимает участие в процессе роста пыльцевой трубки, независимо от потока цитоплазмы, при этом именно полимеризация актина оказывается лимитирующим моментом в процессе ее растяжения (Gibbon et al., 1999; Geitmann et al., 2000; Vidali et al., 2001). Появляются данные, свидетельствующие в пользу представлений о том, что цитоскелет, помимо структурной роли (Geitmann et al, 1996), может выполнять еще и сигнальную роль (Clarke et al., 1998). Установлены различия в морфологии кончика пыльцевой трубки и организации актинового цитоскелета между растущими in vitro и in vivo пыльцевыми трубками лилии (Pierson et al., 1986; Pierson, 1988). Передвижения ядер вегетативной и генеративной клеток связаны с ростом пыльцевой трубки и током цитоплазмы. Этот ток вызван микрофиламентами (Herth, 1978), а его направление - результат взаимодействия микрофиламентов, микротрубочек и эндоплазматического ретикулума (Cresti and van Went, 1976). Жизнеспособная пыльца и пыльцевые трубки выделяют значительное количество белков, включая различные ферменты. Некоторые из них, очевидно, играют существенную роль во взаимодействиях пыльцевой трубки с поверхностью рыльца. Источниками белков являются вегетативная клетка в период восстановления целостности плазмалеммы (разобщение происходит в процессе дегидратации пыльцевого зерна), поверхность экзины, интина

Список литературы

Цена, в рублях: (при оплате в другой валюте, пересчет по курсу центрального банка на день оплаты)	1425

Скачать бесплатно	24770.doc

Найти готовую работу

ЗАКАЗАТЬ

Обратная связь:

Связаться

Вход для партнеров

Регистрация

Восстановить доступ

Материал для курсовых и дипломных работ

15.04.24 Задачи, условия и этапы организации экспериментальной работы

15.04.24 Критерии качества преподавания

15.04.24 Категория нормы в обучающей деятельности

Архив материала для курсовых и дипломных работ

Ссылки:

Счетчики:

© 2006-2022. Все права защищены.
Выполнение уникальных качественных работ - от эссе и реферата до диссертации. Заказ готовых, сдававшихся ранее работ.