Бесплатно скачать, заказать диплом, курсовую, диссертацию Программируемая клеточная смерть дрожжей Saccharomyces cerevisiae, вызванная половым феромоном

У нас уже 176407 рефератов, курсовых и дипломных работ

Сделать закладку на сайт

Заказать диплом, курсовую, диссертацию

Быстрый переход к готовым работам

Мнение посетителей:

Книга жалоб
и предложений

Название	Программируемая клеточная смерть дрожжей Saccharomyces cerevisiae, вызванная половым феромоном

Количество страниц	140

ВУЗ	МГИУ

Год сдачи	2010

Бесплатно Скачать	24935.doc

Содержание	Содержание ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ...8 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ Глава 1. Феномен программируемой клеточной смерти...11 Характерные признаки апоптоза...11 Функции апоптоза у многоклеточных...13 Компоненты каскада самоубийства...14 Роль митохондрий в апоптозе многоклеточных...16 Терминология типов клеточной смерти...18 Апоптотические домены и механизмы апоптоза в разных систематических группах...19 Глава 2. Запрограммированная гибель одноклеточных организмов...22 Инфузории...23 Паразитиеские кинетопластиды...24 Слизевики...25 Одноклеточные автотрофы...26 Архемонады...26 Дрожжи...27 Глава 3. Молекулярные механизмы программируемой клеточной смерти дрожжей...34 Дрожжевая метакасп аза...34 Протеаза Omi...35 AIF...36 Роль митохондрий в программируемой клеточной смерти дрожжей...37 Неспецифическая митохондриальная пора дрожжей...41 Глава 4. Феромонный каскад дрожжей...42 Биология дрожжей...42 Клеточный ответ на половой феромон...44 Гибель клеток S. cerevisiae, вызванная а-фактором...47 Глава 5. Кальций в дрожжах...48 Методы измерения внутриклеточного кальция в S. cerevisiae...48 Поддержание кальциевого гомеостаза в S. cerevisiae...50 Амиодарон...52 Глава 6. Особенности митохондрий пекарских дрожжей...53 Глава 7. Активные формы кислорода...56 Особенности образования и детоксикации АФКу дрожжей S.cerevisiae...58 МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Глава 1. Культивирование дрожжей...63 Генотипы использованных штаммов дрожжей...63 Приготовление среды для культивации...63 Условия культивации...64 Глава 2. Тесты на выживание дрожжей...66 Индукция ПКС...66 Оценка выживаемости по количеству КОЕ...66 Микроскопические методы...67 Глава 3. Синхронизация культуры дрожжей...68 Глава 4. Методы флуоресцентной микроскопии...68 Окрашивание клеток на АФК...68 Окрашивание клеток на митохондрии...69 Окрашивание клеток на Са2+...70 Окрашивание клеток на ДНК*...70 Определение репликативного возраста клеток...70 Глава 5. Выделение митохондрий из Saccharomyces cerevisiae и измерение скорости поглощения кислорода...71 Глава 6. Молекулярно биологические методы...72 Выделение плазмидной ДНК из E.coli на колонках Qiagen miniprep kit...72 Выделение геномной ДНК дрожжей...73 Расщепление и лидирование ДНК дрожжей...73 Аналитический электрофорез ДНК в агарозных гелях...74 Трансформация клеток E.coli методом электропорации...74 Интегративная трансформация дрожжей...74 Получение мутантных линий с полностью инактивированным геном...75 Глава 7. Список использованных реактивов...77 РЕЗУЛЬТАТЫ Глава 1. Исследование модели программируемой клеточной смерти дрожжей штамма W303-1B, вызванной избытком феромона...79 Глава 2. Исследование ПКС, индуцированный высокой концентрацией феромона на линии клеток W303-1B cmd1-6...82 Глава 3. Влияние ингибиторов и антиоксидантов на ПКС клеток W303- 1Bcmd1-6...88 Глава 4. Скрининг генов, участвующих в регуляции программы самоубийства Saccharomyces cerevisiae, вызванного избытком фермона...90 Описание скрининга...90 Результаты скрининга...95 Анализ мутантов на предмет устойчивости к ПКС, вызванной избытком феромона...96 Глава 5 Индукция программируемой клеточной смерти на промежуточных этапах...104 Индукция ПКС пекарских дрожжей перекисью водорода и менадионом...104 Искусственное повышение концентрации цитоплазматического кальция...105 А23187...106 Амиодарон...107 Глава 6. Характерные признаки апоптоза, наблюдаемые в клетках обработанных амиодароном...113 4 Глава 7. Гиперполяризация митохондрий, вызванная амиодароном...114 Изменения дыхания дрожжевых клеток, вызванные амиодароном...115 Глава 8. Образование АФК клетками, вызванное амиодароном...121 Глава 9. Фрагментация митохондрий...126 Глава 10. Исследование функции гена YSP1...128 ОБСУЖДЕНИЕ...130 ВЫВОДЫ...138 Список работ, опубликованных по теме диссертации...139 СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ...140 Введение Список сокращений АДФ - аденозин дифосфат АТФ - аденозин трифосфат АФК - активные формы кислорода БСА- бычий сывороточный альбумин ДМСО - диметилсульфоксид ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота ДНФ - 2,4-динитрофенол ДТТ -дитиотриэтол ДХФ-ДА - дихлорфлуоресцеин диацетат КОЕ - колонии образующие единицы ОРС - открытая рамка считывания ПЦР - полимеразная цепная реакция РНК- рибонуклеиновая кислота РНКаза - нуклеаза рибонуклеиновых кислот ТМР - тетраметилродамин Трис - 1М-трис-[гидроксиметил]-аминометан ЭГТА - (Этилендиокси) диэтилендинитротетрауксусная кислота ЭДТА -Этилендиаминтетрауксусная кислота ЯМР -ядерно магнитный резонанс AIF - фактор индукции апоптоза ANT- переносчик адениловых нуклеотидов, порин APAF-1 - apoptosis activating factor-1, фактор активации апоптоза-1 АР-АТРазы - апоптотическая АТФаза BI1-ингибитор Вах BIR - baculoviral IAP repeats, IAP повторы бакуловируса CsA- циклоспорин А ERK- киназа, регулируемая внешним стимулом FCCP - карбонилцианид-л-трифторметоксифенилгидразон HACS- high affinity calcium influx system, система входа кальция высокой афинности IAP - inhibitor of apoptosis, ингибитор апоптоза JC-1 -5,5',6,6'-тетрахлор-1,1',2,2'-тетраэтилбензимидазолокарбоцианин иодид LACS - low affinity calcium influx system, система входа кальция низкой афинности МАР-киназа - митоген активируемая протеин киназа MATH -meprin and TRAF Homology, домен, гомологичный меприну и TRAF Mops - 4-морфолинопропансульфоновая кислота NADH - никотинамидадениндинуклеотид восстановленный PMSF - фенилметилсульфонилфлюорид SF6847 - 3,5-ди(трет)бутил-4-гидроксибензилиден малонитрил SMAC - second mitochondria-derived activator of caspase, второй митохондриальный активатор каспазы UCP -разобщающий белок VDAC- потенциал-зависимый анионный канал, порин ДТ - мембранный потенциал - электрическая составляющая ДцН+, или разность электрических потенциалов ВВЕДЕНИЕ Исследование механизмов программируемой клеточной смерти имеет большое теоретическое и практическое значение. Контролируемая элиминация клеток играет важную роль в онтогенезе, функционировании иммунитета и поддержании тканевого гомеостаза. До недавних пор считалось, что программируемая клеточная смерть (апоптоз) присуща только многоклеточным животным или растениям (Vaux et al., 1996, Huettenbrenner et al., 2003). Такое мнение было основано на том факте, что анализ геномов одноклеточных организмов не выявлял гены, гомологичные генам, кодирующих апоптотические белки многоклеточных животных. Однако увеличение количества полностью отсеквенированных геномов, а также обнаружение новых семейств апоптотических белков, позволило обнаружить их гомологи в одноклеточных эукариотах и даже в бактериях (Aravind et al., 1999, Koonin & Aravind, 2002). Одновременно было обнаружено, что программируемую клеточную смерть, сходную с апоптозом высших эукариот по цитологическим признакам, можно вызвать различными искусственными и природными индукторами у целого ряда одноклеточных организмов: дрожжевых грибов, кинетопластид, инфузорий, одноклеточных водорослей (см Гордеева и др., 2004). До последнего времени основным объектом исследования при изучении апоптоза были клеточные линии высших эукариот, тогда как использование дрожжей Saccharomyces cerevisiae в качестве модельного организма значительно удобнее в экспериментальном плане. Пекарские дрожжи, в отличии от клеточных линий многоклеточных, значительно более удобны для всевозможных генетических манипуляций, в том числе и для проведения широкомасштабного генетического скрининга. В 1998 году был проведен скрининг дрожжевых клеток, экспрессирующих библиотеку кДНК человека на предмет устойчивости к действию проапоптоического белка Вах, который также был экспрессирован в этих клетках. В результате этого скрининга был идентифицирован новый антиапоптотический белок, ингибитор Вах — ВИ (Xu et al., 1998). Однако подобный генетический 8 скрининг так и не был осуществлен с естественными индукторами программируемой клеточной смерти пекарских дрожжей. Это упущение было связано с тем, что большинство известных к тому времени индукторов программируемой смерти вызывали программируемую гибель лишь в части клеток, тогда как остальные клетки гибли либо неспецифическим способом (их смерть не подавлялась ингибиторами синтеза белка), либо оставались живы (в случае гибели клеток, вызванной старением или мутаций в шапероне гистонов). Однако совсем недавно был обнаружен еще один естественный индуктор программируемой клеточной смерти пекарских дрожжей. Оказалось, что половой феромон (скрактор) в высоких концентрациях вызывает программируемую гибель небольшой фракции клеток дрожжей дикого типа (Severin & Hyman, 2002). Но если использовать штаммы, сверхчувствительные к половому феромону, то можно создать условия, где практически все клетки, обработанные феромоном, будут нежизнеспособны. Затем, если такие гиперчувствительную штаммы трансформировать транспозонной библиотекой для инактивации случайных фрагментов генов (или целых генов) и обработать их высокой концентрацией феромона, можно идентифицировать мутантные линии с нарушенной программой самоубийства. Идентифицировав положение вставки, можно узнать, какие гены дрожжей являются необходимыми для реализации этой программы. Проведение такого скрининга и идентификация роли найденных генов в программе самоубийства дрожжей были поставлены в качестве задач настоящей работы. Для линий клеток многоклеточных животных, в ряде случаев, достаточно подробно изучен механизм реализации программы самоубийства, тогда как в случае пекарских дрожжей до сих пор были получены только предварительные сведения, не раскрывающие механизмов этой программы. Поэтому, перед нами была поставлена задача выяснить последовательность и взаимосвязь процессов, происходящих в клетке при активации программы самоубийства половым феромоном. Поскольку цитологические и молекулярные признаки программируемой гибели одноклеточных организмов во многом схожи с таковыми для клеток многоклеточных животных, то есть основание полагать, что исследование механизма программируемой гибели дрожжей позволит выявить некоторые общие закономерности апоптоза. Особый интерес в этой связи представляет собой исследование роли митохондрий в программе самоубийства дрожжевой клетки. Для клеток млекопитающих было показано, что митохондрии играют важную роль в регуляции программы самоубийства. Предполагается, что явление апоптоза могло возникнуть одновременно с возникновением митохондрий (цит. по Koonin & Aravind 2002), что объясняет важную сигнальную роль этой органеллы в апоптозе. Кроме того энергетика клетки находится в сильной зависимости от функционального состояния митохондрий. При апоптозе клеток многоклеточных животных митохондрии являются основным источником активных форм кислорода. In vitro было показано, что митохондрии дрожжей также могут образовывать АФК (Chance 1979). Однако до сих пор оставалось неизвестным, являются ли митохондрии источником АФК in vivo. Исследование этого вопроса позволило бы в определенной степени управлять процессом программируемой смерти в одноклеточных организмах. Поэтому, перед нами была также поставлена задача выяснить судьбу и роль митохондрий в программируемой клеточной смерти дрожжей. Понимание механизмов контролируемой клеточной смерти дрожжей имеет значение не только в связи с тем, что позволяет проводить аналогии с апоптозом высших эукариот. Очевидно, что механизмы самоубийства клеток грибов и млекопитающих имеют более или менее существенные отличия, что позволяет надеяться на создание новых специфических антигрибковых препаратов (Philips et a)., 2003). 10 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1. Феномен программируемой клеточной смерти Характерные признаки апоптоза Более 30 лет назад Керр и соавторы предложили различать два типа клеточной смерти, апоптоз и некроз (Kerr et al., 1972). С тех пор под термином «апоптоз» стали понимать явление программируемой клеточной смерти (ПКС), сопровождаемой набором характерных только для этого типа смерти морфологических признаков (маркеров апоптоза) и молекулярных процессов. Были выявлены следующие характерные признаки апоптоза, позволяющие отличить его от некроза: переход фосфатидилсерина из внутреннего монослоя цитоплазматической мембраны в наружный монослой (Fadok et al., 1992), выход цитохрома с из межмембранного пространства митохондрий в цитоплазму (Kluck et al., 1997, Yang et al., 1997), активация цистеиновых протеиназ (каспаз) (Yuan et al., 1993), образование АФК, сморщивание (blebbing) цитоплазматической мембраны, уменьшение объема клетки, разрывы нитей ядерной ДНК в межнуклеосомальных участках, конденсация хроматина по периферии ядра, последующий распад ядра на части, фрагментация клеток на визикулы с внутриклеточным содержимом - апоптотические тельца. В отличие от некроза, в случае апоптоза целостность цитоплазматической мембраны сохраняется до поздних стадий процесса. Кроме того, в большинстве случаев процесс апоптоза, в отличие от некроза, зависит от уровня АТФ в клетке (Salvioli et al., 2000, Nicotera et al., 2004, цит. по Самуилов и др. 2000, Skulachev, 1999). Однако четко разграничить апоптоз и некроз довольно трудно, поскольку, с одной стороны, были описаны типы программируемой клеточной смерти, протекающие без проявления ряда характерных для апоптоза признаков, например апоптоз без выхода цитохрома с (Chauhan et al., 1997) или без активации каспаз (Sarin et al., 1997), с другой - в ряде случаев было показано, что некроз также является активной клеточной смертью, требующей активности определенных белков 11 (На & Snyder, 1999). Кроме этого, в экспериментальных условиях, процесс гибели клеток может начинаться с признаками апоптоза, но в последствие заканчиваться некротической гибелью. Все это послужило поводом для введения различными авторами терминов, таких как параапоптоз, апонекроз и другие. Для того, чтобы избежать возможных противоречий при использовании этих терминов, ниже мы попробуем систематизировать современную терминологию способов клеточной гибели. Как уже было сказано выше, ПКС была обнаружена и интенсивно изучалась в клетках высших эукариот. До недавнего времени считалось, что ПКС свойственно исключительно многоклеточным, поэтому сложилась необычная ситуация, заключающаяся в том, что механизмы апоптоза достаточно хорошо изучены в многоклеточных и не изучены в модельных одноклеточных организмах, таких как дрожжи. Поэтому мы вынуждены рассматривать общие закономерности апоптотического каскада на основании данных, полученных для клеток млекопитающих. Рассмотрим последовательность событий в апоптотическом каскаде животных клеток. Первым этапом является инициация апоптоза, которая может происходить как за счет внешних стимулов, например, связывания фактора некроза опухоли с рецептором, так и за счет внутренних, таких как нарушение ядерной ДНК, приводящее к активации белка р53, или увеличение интенсивности образования АФК митохондриями (цит. по Skulachev, 2002). После этого идет «принятие решения» клеткой, активировать каскад самоубийства или нет. В случае с внутренним сигналом, прежде чем начать необратимое саморазрушение, клетка обычно пытается устранить причину появления этого сигнала. Так, в случае слабого повреждения ДНК, белок р53 сначала индуцирует репарацию и только если эти попытки оказываются недостаточно эффективными, вызывает остановку клеточного цикла и апоптоз (см Norbury et al., 2004). Если часть митохондрий интенсивно образуют АФК, опасные для клетки, то клетка сначала запускается механизм элиминации отдельных митохондрий и только потом, в случае неудачи, инициирует собственное самоубийство (см Скулачев 1999). Следующим этапом идет амплификация сигнала. Какой бы 12 не была цель элиминации клетки (например, защита от вирусов или дифференцировка), для успешного ее достижения процесс элиминации должен протекать достаточно быстро. При апоптозе быстрая скорость осуществления программы достигается с помощью каскада ферментов, специфически активирующих друг друга и создающих петли положительной обратной связи. Примером такой петли может служить инактивация каспазой-3 белка Bcl-2, который ингибирует выход из митохондрий цитохрома с, инициирующего цепь событий, приводящую к активации каспазы-3 (Kirsch etal., 1999). Заключительным этапом программы апоптоза является гидролиз компонентов клетки с помощью неспецифических протеаз и нуклеаз. Функции апоптоза у многоклеточных Зачем многоклеточным организмам нужно контролируемое уничтожение отдельных клеток? Обычно выделяют следующие функции программируемой клеточной смерти: 1. Участие в онтогенезе. В ходе развития, часть клеток становится ненужной, и апоптоз считается экономичным, быстрым и аккуратным способом их элиминирования. Так, например, происходит рассасывание хвоста у головастика (Kashiwagi et al., 1999), рассасывание ткани в промежутках между закладывающимися пальцами рук у эмбриона (Nagasawa etal., 1997). 2. Поддержание тканевого гомеостаза. Так в крови большинство новообразованных нейтрофилов гибнет в течении нескольких дней, не выполняя при этом никаких функций. Поддержание такого футильного цикла необходимо для быстрой мобилизации большого количества иммунных клеток в случае распространения инфекции (см. Raff 1998). 3. Защита от распространения вирусов. Примером здесь может служить программируемая клеточная смерть (гиперчувствительный ответ) у растений, инфицированных вирусом табачной мозаики (см. Ванюшин, 2001). 13 4. Элиминация опухолевых клеток. Нарушения программы апоптоза повышает вероятность возникновения опухолей. Например, в более чем половине исследованных опухолях оказался нарушенным или отсутствовал белок р53, который в ответ на повреждение ДНК вызывает остановку клеточного цикла или активирует программу самоубийства (цит. по Cohen et al., 1995). Компоненты каскада самоубийства Мы не будем подробно останавливаться на всех компонентах каскада самоубийства, известных для клеток высших эукариот, а рассмотрим только те из них, для которых известны гомологи или функциональные аналоги в клетках дрожжей. Важным белковым семейством, принимающих участие в регуляции и реализации каскада самоубийства клеток животных, являются каспазы. Они представляют собой специфические цистеиновые протеазы, гидролизующие пептиды в участках, содержащих остатки аспарагиновой кислоты. В большинстве случаев каспазы синтезируются в качестве неактивных проферментов, а при индукции апоптоза самоактивируеются за счет гидролиза ингибиторного домена. Каспазы обычно разделяют на две группы. К первой группе относятся каспазы со сверхвысокой специфичностью (гидролизующие обычно один определенный белок в определенном месте), их активность необходима для амплификации сигнала, вызывающего самоубийство клетки. У представителей этой группы помимо каталитического домена обязательно присутствует адапторный домен. Стоит отметить, что к этой группе также относится несколько представителей семейства каспаз, не принимающих непосредственное участие в реализации программы апоптоза. Например, каспаза 5 играет важную роль в процессе созревания некоторых интерлейкинов. Ко второй группе относят «исполняющие» каспазы, субстратом которых являются большинство растворимых белков клетки. К этой группе относятся каспазы 3, 6 и 7 (см Adams, 2003, Shi et al., 2002). 14 Несмотря на то, что в геноме пекарских дрожжей нет последовательностей, гомологичным белкам семейства Bcl-2 (Koonin & Aravind, 2002), недавно было показано, что некоторые белки, регулирующие митохондриальное деление и слияние, могут в некоторых случаях функционально заменять их (Fannjiang et al., 2004). Среди представителей семейства Bcl-2 есть как активаторы, так и ингибиторы апоптоза. Примером активатора апоптоза может служить белок Вах. Встраиваясь во внутреннюю мембрану митохондрий, этот белок вызывает выход цитохрома с в цитоплазму, однако данные о возможных механизмах его действия (Eskes et al., 1998, Pastorino et al., 1999, De Giorgi et al., 2002). Примером ингибитора апоптоза может быть белок Bcl-2, который может связываться с белком Вах и, таким образом, предотвращать развитие программы апоптоза (Sedlaketal., 1995). Еще одной группой белков, принимающих участие в регуляции апоптоза многоклеточных, являются МАР-киназы (MAP - от mitogene activated protein). Эти белки активируются при активации рецептора, связанного с G-белком, который активирует киназу киназы МАР-киназы (МАРККК), которая, в свою очередь, активирует киназу МАР-киназы (МАРКК). Активированная МАР-киназа фосфорилируют белки-мишени (например, транскрипционные факторы). МАР-киназы играют ключевую роль в регуляции дифференцировки эукариотических клеток (Alberts, MBC III). Роль МАК-киназ в апоптозе зависит в значительной степени от типа клеток, индуктора апоптоза и еще ряда факторов, например, количества делений после дифференцировки (Wada & Penninger 2004). Однако, в большинстве случаев МАР-киназы ERK-сигнального пути, активируемые факторами роста, являются антиапоптотическими, тогда как стресс-активируемые МАР-киназы (р38 и JNK1/2/3) необходимы для протекания апоптоза (Wada et al., 2004). 15 Роль митохондрий в апоптозе многоклеточных Как уже указывалось выше скорость протекания апоптоза является очень важным параметром. Для получения возможности быстро самоуничтожиться клетка должна содержать уже синтезированные компоненты системы самоубийства, однако они должны быть пространственно разделены со своими субстратами или активаторами. В качестве таких двух различных компартментов эволюцией были выбраны цитоплазма и митохондрии (преимущественно межмебранное пространство митохондрий). Возможно, что использование митохондрий в качестве хранилища активаторов апоптоза обусловлено происхождением эукариот (Kroemer et al., 1997). В норме в межмембранном пространстве митохондрий клеток многоклеточных животных содержатся белки AIF (apoptosis inducing factor), SMAC (second mitochondria-derived activator of caspase), цитохром с, протеаз типа HtrA и эндонуклеаз G. При активации апоптоза эти белки выходят из митохондрий в цитоплазму, a AIF и эндонуклеаза G транспортируются в ядро (цит. по Punj et al., 2003). Созревание этих белков должно происходить уже после попадания в межмембранное пространство. В случае с цитохромом с это достигается тем, что на рибосомах синтезируется апоптотически неактивный апоцитохром с, лишенный гема, и только при попадании в межмембранное пространство к нему присоединяется гем с помощью специфического фермента гем-лиазы, локализованной в межмембранном пространстве митохондрий (Nicholson et al., 1989). Судьба этих белков после выхода из межмембранного пространства митохондрий в цитоплазму совершенно разная. AIF и эндонуклеаза G, как уже было сказано выше, переносится в ядро (Daugas et al., 2000), где принимают участие в разрушение ядерной ДНК (Wang et al., 2002). Стоит отметить, что при активации и релокализации этих двух белков гибель клеток не зависит от функций каспаз (Daugas et al., 2000). Вышедшая из межмембранного пространства протеаза OMI активирует апоптоз двумя способами: за счет собственной протеазной активности (независимо от каспаз), или за счет инактивации антиапоптотических белков IAP (inhibitor of apoptosis), ингибиторов каспаз 16 (Hedge et al., 2002). Вышедший цитохром с связывается с другим апоптотическим белком Apaf-1 (apoptosis activating factor-1), что приводит к образованию большого белкового комплекса - апоптосомы. На этом комплексе концентрируются неактивные прокаспазы 9, которые за счет сближения получают возможность гидролизовать друг друга и превращаться в активные каспазы 9 (Zou et al., 1999). Вышедший в цитоплазму цитохром с может играть и антиапоптотическую функцию, поскольку он является эффективным антиоксидантом, однако это справедливо, по-видимому, только при выходе в цитоплазму небольшого количества цитохрома с (Skulachev, 1998). Механизм выхода белков межмембранного пространства митохондрий, особенно цитохрома с, в цитоплазму до сих пор остается предметом дискуссии. В настоящее время предполагается два возможных механизма выхода цитохрома с. Первый предполагает образование апоптотическим белком Вах при его олигомеризации специфической или неспецифической поры в наружной мембране митохондрий, тогда как другая предполагает набухание митохондрий и при открытие Са2+-зависимой CsA-чувствительной поры, вызывающее нарушение целостности наружной мембраны и выход содержимого межмембранного пространства митохондрий в цитоплазму (Desagher & Martinou, 2000). По-видимому, у клеток многоклеточных животных могут реализоваться оба эти сценария. Роль митохондрий не ограничивается хранением и регуляцией выхода апоптотических белков. Недавно было показано, что в некоторых вариантах апоптоза происходит фрагментация митохондрий (Skulachev et al.,2004), a белок Fzo1, участвующий в процессе слияние митохондрий, ингибирует апоптоз (Sugioka et al., 2004). При исследование апоптоза некоторых типов клеток многоклеточных животных, вызванного различными индукторами, было показано, что на ранних этапах апоптоза (до активации каспаз и перераспределения фосфатидилсерина в цитоплазматической мембране) происходит гиперполяризация митохондрий (Banki et al., 1999), связанная с временным ингибированием митохондриальной АТФ-синтетазы, снижением

Список литературы

Цена, в рублях: (при оплате в другой валюте, пересчет по курсу центрального банка на день оплаты)	1425

Скачать бесплатно	24935.doc

Найти готовую работу

ЗАКАЗАТЬ

Обратная связь:

Связаться

Вход для партнеров

Регистрация

Восстановить доступ

Материал для курсовых и дипломных работ

15.04.24 Задачи, условия и этапы организации экспериментальной работы

15.04.24 Критерии качества преподавания

15.04.24 Категория нормы в обучающей деятельности

Архив материала для курсовых и дипломных работ

Ссылки:

Счетчики:

© 2006-2022. Все права защищены.
Выполнение уникальных качественных работ - от эссе и реферата до диссертации. Заказ готовых, сдававшихся ранее работ.