У нас уже
176407
рефератов, курсовых и дипломных работ
Сделать закладку на сайт
Главная
Сделать заказ
Готовые работы
Почему именно мы?
Ценовая политика
Как оплатить?
Подбор персонала
О нас
Творчество авторов
Быстрый переход к готовым работам
Контрольные
Рефераты
Отчеты
Курсовые
Дипломы
Диссертации
Мнение посетителей:
Понравилось
Не понравилось
Книга жалоб
и предложений
Название
Изменение липиднозо состава перитонеальнын макрофагов и ик ядер при апоптозе и некрозе
Количество страниц
110
ВУЗ
МГИУ
Год сдачи
2010
Бесплатно Скачать
24809.doc
Содержание
Содержание
ВВЕДЕНИЕ... 6
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ... 10
1.1. Макрофаги... 10
1.1.1. Морфологические особенности и молекулярно- 10 генетическая организация макрофагов...
1.1.2. Реактивность макрофагов как механизм, регулирующий воспаление... 13
1.2 Апоптоз и некроз - две формы гибели клетки 17
1.3. Роль липидов в апоптозе и некрозе... 25
1.3.1. Липидыядра... 25
1.3.2. Роль липидов в рецепции и внутриклеточной сигнализации. 28
1.3.3. Перекисное окисление липидов и его роль в реализации программы апоптоза и некроза... 33
1.4. Роль липополисахаридов, активных форм кислорода и медиаторов воспаления в апоптозе и некрозе макрофагов... 37
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ... 43
2.1. Материалы... 43
2.2. Методы... 43
2.2.1 Объект исследования... 43
2.2.2. Получение перитонеальных макрофагов... 44
2.2.2.1. Постановка эксперимента... 44
2.2.3. Выделение ядер ПМФ... 45
2.2.4. Определение жизнеспособности клеток... 45
2.2.5. Экстракция липидов из ПМФ и их ядер... 46
2.2.6. Определение диеновых, триеновых коньюгатов и малонового диальдегида в ПМФ и их ядрах... 46
с
2.2.7. Фракционирование липидов в тонких слоях силикагеля и их количественное определение... 47
2.2.8. Определение активности СОД и каталазы в ПМФ и их ядрах...-----... 49
2.2.9. Определение концентрации общего белка в ПМФ и их ядрах... 50
2.3. Выделение и электрофорез ДНК макрофагов в агарозном
геле...____... 51
2.3.1. Приготовление агарозного геля...52
2.3.2. Определение концентрации ДНК...__53
2.3.3. Световая и флуоресцентная микроскопия ПМФ...53
2.3.4. Окрашивание по Паппенгейму-Крюкову... 54
2.3.5. Окрашивание акридиновым оранжевым... 54
2.3.6. ОкрашиваниеHoechst33258... 55
2.3.7. Статистическая обработка данных... 55
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ... 56
3.1 Влияние перекиси водорода и ЛПС Е. coli на гибель пери-
тонеальных макрофагов... 56
3.2. Влияние перекиси водорода и ЛПС Е. coli на спектр липи- дов перитонеальных макрофагов и их ядер... 65
3.3. Изменение окисленности липидов при Н2О2 и ЛПС Е. coli -индуцируемой гибели ПМФ... 75
3.4. Влияние Н2Ог и ЛПС Е. coli на активность некоторых анти-оксидантых ферментов... 82
3.5. Влияние модификаторов фосфоинозитидного цикла на гибель перитонеальных макрофагов... 88
3.6. Влияние модификаторов Са2+-проницаемости на Н2О2-индуцированный апоптоз перитонеальных макрофагов...93
с
ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ... 97
* ВЫВОДЫ...108
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 110
Введение
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ АО - антиоксиданты; АФК - активные формы кислорода; ГДФ-гуанозин дифосфат;
ГТФ - гуанозин трифосфат;
GM-CSF — гранулоцит-макрофаг-колониестимулирующий фактор;
1,2 ДАГ- 1,2 диацилглицерол;
ДК — диеновые конъюгаты;
ИЛ - интерлейкин;
П*з — инозитол (1,4,5) трифосфат;
у-ИФН - гамма-интерферон;
* Са2+ - ионы кальция;
КТ-каталаза;
ЛПС - липополисахарид;
МДА - малоновый диальдегид;
НАДФН — никотинамидадениндинуклеотидфосфат восстановленный;
НТС - нитросиний тетразолий;
ПМФ — перитонеальные макрофаги;
Н2О2 - перекись водорода;
ПКС - протеинкиназа С;
ПОЛ - перекисное окисление липидов; ^ СОД - супероксиддисмутаза;
ТК - триеновые конъюгаты;
TGF В - трансформирующий ростовой фактор Р;
ФНО-а - фактор некроза опухоли а;
ФМСФ - фенилметансульфонил фторид
ФИзК — фосфатидилинозитол-3-киназа;
ФЛС - фосфолипаза С;
ФИ-цикл - фосфоинозитидный цикл; "# ЭДТА - этилендиаминтетрацетат.
1?
Введение
Актуальность проблемы. В формировании и функционировании многоклеточного организма, принимают участие две формы клеточной гибели — некроз и апоптоз, имеющие морфологические, биохимические и генетические особенности. Некроз ассоциируется с действием вредоносных агентов и факторов, характеризуется нарушением целостности клеточной мембраны. Апоптоз, как генетически детерминированный процесс гибели реализуется при наличии внешних стимулирующих сигналов и внутренних предпосылок, связанных с появлением нерепарируемых повреждений ДНК.
В последние годы получены веские доказательства участия липидов не только в функционировании клеточных мембран, но и в молекулярной орга-низации хроматина и хромосом, в регуляции генетических процессов — транскрипции и репликации (Слюсарь Н. Н., 1999; Стручков В. А., 2000; Martelli A. M. et al., 2004). В ядре обнаружены сигнальные системы, включая фосфоинозитидный и сфигномиелиновый циклы (Marshall С. J., 1995; Alan W., Ulrich M, 2002). Важной формой участия липидов в межклеточной стимуляции является то, что модификация липидного микроокружения рецепторов изменяет их чувствительность (Белоконева О. С., 1993; Проказова Н. В. и др.,1998; Самуилов В. В., 2000; Gordon S. et al., 1995). Очевидно, что изменения в обмене липидов могут играть важную роль в регуляции клеточных процессов, включая и ядерную активность. При этом нарушения липидного гомеостаза, обусловленные активизацией процессов пероксидации липидов и фосфолипазами, приводящие к изменению клеточного статуса, в конечном итоге могут способствовать апоптозу или некрозу клетки (Егорова А. Б. и др., 2001; Butthe Т. М., Sadstrom Р. А ., 1994; Hale A. J. et al., 1996).
Для изучения роли липидов в реализации программы апоптоза и некроза подходящим объектом выступают перитонеальные макрофаги, которые являются реактивными клетками, реализующими широкий спектр функциональных возможностей при воспалении (Щербаков В. И., 1990; Зубова С. Г.,
Окулов В. Б., 2001). При этом в очаге воспаления перитонеальные макрофаги функционируют в среде, содержащей в больших количествах активные формы кислорода и липополисахариды, мишенями действия которых могут выступать липиды (Пескин А. В., 1996; Weinstein S, L., et al., 1991; Vesy C. J., 2000). Известно, что при воспалении в МФ усиливается липидныЙ метаболизм, усиливаются процессы пероксидации липидов (Gordon S. et al., 1997). Макрофаги отвечают на воздействие разнообразных агонистов, быстро гид-ролизуя мембранные фосфолипиды, что приводит к генерации большого числа внутриклеточных и экстраклеточных мессенджеров, в результате чего реализуется многофункциональный потенциал этих клеток (Клебанов Г. И., Владимиров Ю.А., 1999). Одним из наиболее ранних событий, запускаемых в макрофагах при воспалительных реакциях, является активация сигнальных путей с участием фосфоинозитидспецифической фосфолипазы С и фосфоли-пазы Аг, играющих ключевую роль в хемотаксисе, секреции, фагоцитозе (Попова Е. Н. и др., 2002; Rao D.M. et al., 1995; Lee S. В., Rhee S. G., 1995; Yoshinori N., 2002).
Таким образом, ПМФ являются функционально активными клетками и снижение их активности приводит к снижению эффективности воспалительного процесса. Очевидно, что поврежденные ПМФ должны быть элиминированы.
В связи с этим, представлялось целесообразно исследовать изменения в спектре липидов перитонеальных макрофагов и их ядер при индуцированной гибели клеток перекисью водорода и липополисахаридом из Е. Coli.
Цель и задачи исследования. Цель настоящей работы состояла в изучении изменений состава липидов перитонеальных макрофагов и их ядер при апоптозе и некрозе.
Для достижения данной цели были поставлены следующие задачи:
1. Изучить влияние перекиси водорода и ЛПС Е. coli на апоптоз и некроз перитонеальных макрофагов.
2. Исследовать изменение спектра липидов перитонеальных макрофагов и их ядер при Н2О2 и ЛПС Е. coli индуцируемой гибели клеток. ^ 3. Исследовать активность процессов перекисного окисления липидов
и ключевых антиоксидантных ферментов (супероксиддисмутазы и каталазы) в перитонеальных макрофагах и их ядрах при Н2О2 и ЛПС Е. coli индуцируемой гибели клеток.
4. Изучить влияние модификаторов фосфоинозитидного цикла на гибель перитонеальных макрофагов.
5. Изучить влияние модификаторов Са2+-проницаемости на Н2С>2-индуцированный апоптоз и некроз перитонеальных макрофагов..
Научная новизна работы. Впервые проведено широкое комплексное
исследование липидного компонента перитонеальных макрофагов и их ядер Mi
при апоптозе и некрозе. Показано, что перекись водорода в концентрации 1
мМ и ЛПС Е. coli в концентрации 1 мкг/мл вызывают гибель перитонеальных макрофагов преимущественно путем апоптоза. Определена склонность перитонеальных макрофагов к гибели по пути апоптоза или некроза при соответствующих изменениях в спектре липидного компонента клеток и их ядер, при изменении активности процессов перекисного окисления липидов: и ключевых антиоксидантных ферментов (супероксиддисмутазы и каталазы) макрофагов. С помощью модификаторов ФИ-цикла показано, что нарушение . в обмене ФИ-цикла является одной из причин толкающих клетку на путь апоптоза; выявлено влияние модификаторов Са2+-проницаемости на Н2О2-индуцированный апоптоз и некроз перитонеальных макрофагов. Положения, выносимые на защиту:
1. Перекись водорода и ЛПС Е. coli дозозависимым образом стимулируют апоптоз и некроз перитонеальных макрофагов.
2. Перестройки в спектре липидов перитонеальных макрофагов и их ядер происходят при развитии как апоптотического так и некротического
^ процесса, индуцируемого перекисью водорода и ЛПС Е. coli.
3. Перекись водорода и ЛПС Е. coli усиливают процессы пероксидации липидов и снижают антиоксидантную защиту перитонеальных макро-
Iй* фагов и их ядер, что провоцирует их гибель.
4. В реализации программы апоптоза перитонеальных макрофагов важную роль играют ФИ-цикл и ионы Са2+.
Теоретическая и практическая значимость работы. Данные проведенного комплексного исследования вносят существенный вклад в решение фундаментальной проблемы биологии клетки — проблемы молекулярных механизмов гибели клетки, расширяя представления об участии липидов в апоптозе и некрозе. Эта область исследований имеет не только теоретическую, но и практическую значимость. На основании динамики изменения со-
н
держания индивидуальных липидов можно выявлять склонность клетки к
апоптозу или некрозу.
Практическую ценность имеют данные о влиянии перекиси водорода, ЛПС Е. coli, модификаторов ФИ-цикла и Са2+-проницаемости на гибель перитонеальных макрофагов. Полученные данные позволяют рекомендовать использование перекиси водорода как эффективного индуктора апоптоза, выявляющего и элиминирующего популяцию клеток с генетическими повреждениями.
Апробация работы. Материалы, представленные в диссертации, были ^ доложены на международной научной конференции «Биотехнология на рубеже двух тысячелетий» (Саранск, 2001 г), на международной конференции «Рецепция и внутриклеточная сигнализация» (Пущино-на-Оке, 2003 г.), на III Российском конгрессе по патофизиологии с международным участием «Диз-регуляционная патология органов и систем» (Москва, 2004 г.), на ежегодных Огаревских чтениях (научных конференциях Мордовского госуниверситета) (Саранск, 2001, 2003, 2004 г.), на международной научной конференции «Современные медицинские технологии» (Хорватия, У маг, 2004 г.).
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
# 1.1. Макрофаги
i
1.1.1. Морфологические особенности и молекулярно-генетическая организация макрофагов
Макрофаги - наиболее филогенетически древние элементы соединительной ткани и иммунной системы, являются важным компонентом воспалительных процессов, реагируют на бактериальные и вирусные инфекции, лучевое и химиотерапевтическое воздействие, вторичные инфекции опухо-лей, продукты клеточного распада (Зубова С. Г., Окулов В. Б., 2001).
Макрофаги относят к мононуклеарным фагоцитам, которые включают происходящие из единой стволовой клетки костномозговые предшественники - монобласт и промоноцит; циркулирующий в крови моноцит и зрелые тканевые макрофаги. При осуществлении своей защитной роли моноциты, под действием хемотаксических молекул, в течение 2-3 суток из кровяного русла мигрируют в очаг воспаления, делятся и пополняют популяцию зрелых резидентных макрофагов, которые в свою очередь фагоцитируют вторгшиеся микроорганизмы и погибающие нейтрофилы (Маянский А. Н., Маянский Д. ^ Н., 1989).
В зависимости от места локализации различают: плевральные и перито-неальные макрофаги; звездчатые ретикулоэндотелиоциты (купферовские клетки) печени; альвеолярные макрофаги; интердигитарные клетки лимфатических узлов; макрофаги вилочковой железы (тимические); костномозговые макрофаги остеокласты синовиальные клетки (тип А); глиальные макрофаги (микроглиоциты) мозга; мезангиальные клетки почек; поддерживающие клетки (клетки Sertoli) яичка; дендритные клетки лимфатических узлов и селезенки; клетки Лангенгарса кожи и слизистых оболочек (Маянский А. Н.,
10
t
a
Маянский Д. Н., 1989; Смирнов В. С, Фрейдлин И. С, 2000; Дранник Г. Н., 2003). Особенно высоко их содержание в печени - 56,4 %; легких - 14,9 %; брюшной полости - 7,6 %; в других тканях 21,1 %. Живут тканевые макрофаги от 40 до 60 суток (Дранник Г. Н., 2003). Если говорить об усредненном макрофаге, то он обычно имеет овальное или почковидное ядро, содержит лизосомы и эндоцитозные вакуоли. Поверхность макрофагов имеет бахромчатый вид, при стимуляции число ворсинок и отростков мембраны увеличивается (Маянский А. Н., Маянский Д. Н., 1989). Помимо этого на поверхности клетки наблюдаются многочисленные глубокие, почти сферические выемки диаметром от 0,1 мкм и больше, имеющие вид вакуолей (рис.1).
Рис.1. Перитонеальные макрофаги мыши (Карр Ян, 1978).
На внешней стороне клеточной мембраны находится клеточная мантия или кайма, состоящая из мукоидных веществ, имеющая важное значение в распознавании инородного материала, фагоцитозе и прилипании к стеклянным поверхностям. Мембранные системы макрофагов хорошо развиты, и представлены гранулярной эндоплазматической сетью. Митохондрии в ос-
4*
новном вытянутой формы, длиной 1-4 мкм, с обычными кристами и гранулами. В цитоплазме встречаются немногочисленные липидные гранулы. Мо- лодые клетки имеют круглое и овальное ядро нежной структуры, содержащее иногда 1-2 ядрышка. У более зрелых клеток ядро грубее, имеет выемку, хорошо видны ядерные структуры - ядерные поры, плотная пластинка (lamina densa), расположенная под ядерной оболочкой, хорошо развита, хроматин обычно связан с перихроматиновым и интерхроматиновыми гранулами. Часто можно видеть ядрышко, содержащее рибонуклеопротеидные гранулы, связанные с хроматином. Цитоплазма широкая и не резко очерчена, содержит различные включения: азурофильные зерна, обломки клеток, глыбки пигмента, жировые капли (Карр Ян, 1978). . Особенностью тканевых макрофагов является наличие лизосом диамет-
ром 0,25 - 0,5 мкм, в которых содержатся ферменты: кислые гидролазы, липаза, катепсин, эластаза, лизоцим, миелопероксидаза, коллагеназа, а также катионные белки и лактоферрин, рибонуклеазы эстераза различных типов, Р - глюкуронидаза, Р - галактозидаза, лизоцим, цитохромоксидаза, пероксидаза, нафтиламидаза, ацеилглюкозаминидаза, АТФ-аза, 5-нуклеотидаза и различные окислительные ферменты, включая сукцинат-, лактат- и малатдегидро-геназу, НАДФ-диафоразу (Дранник Г. Н., 2003). Однако, ферментное содержание и метаболические различия макрофагов разных мест локализации
ц зависят от свойств микроокружения (Карр Ян, 1978). Это достаточно наглядно прослеживается при сравнении макрофагов из легочных альвеол и брюшной полости. Альвеолярные макрофаги преимущественно аэробы, зависят от окислительного фосфорилирования. В аэробной среде легких они хорошо адаптируются к микроокружению. Напротив, перитонеальные макрофаги -факультативные анаэробы, их функции обеспечиваются за счет гликолиза, что позволяет им успешно приспособиться к менее богатой кислородом среде брюшной полости. Поэтому дыхательные ферменты типа сукцинатдегид-
* рогиназы и цитохромоксидазы, участвующие в окислительном фосфорили-
12
ровании, более активны в альвеолярных макрофагах, пируваткиназа и фос-фофруктокиназа — важнейшие гликолитические ферменты, более активны в : перитонеальных макрофагах. Продукция эластазы, плотность Fc-рецепторов
выше в альвеолярных макрофагах, а плотность СЗ-рецепторов и экспрессия la-белков выше в перитонеальных (Клебанов Г. И., 1999).
Таким образом, макрофаги — это крайние гетерогенная клеточная популяция. Локализуясь, после дифференцировки, в разных тканях, макрофаги, по-видимому, имеют генетически детерминированные различия метаболизма, что помогает им адаптироваться при разном микроокружении и выполнять свои функции.
т
, 1.1.2. Реактивность макрофагов как механизм, регулирующий воспаление
т>
Воспаление является очень динамичным процессом, в котором участвует большое количество специализированных клеток. Макрофагам отводится важная роль в регуляции клеточного состава непосредственно в очаге воспаления. В очаге острого воспаления в первые часы моноциты/макрофаги составляют менее 5% инфильтрующих клеток, значительно уступая по численности гранулоцитам. Однако уже спустя 4 часа в воспалительном инфильтрате и сосудистом русле уменьшается число нейтрофилов и возрастает число ц мононуклеаров, а через 24 - 28 часов от начала воспаления макрофаги становятся доминирующими клетками инфильтрата, приходя на смену быстро погибающим нейтрофилам (Benjamini E. et al., 1996).
В активированном состоянии макрофаги секретируют огромное число различных факторов и обладают фагоцитарной активностью. Реактивность макрофагов является одним из лимитирующих факторов, определяющих эффективность воспаления (Маянский А. Н., Маянский Д. Н., 1989; Щербаков В. И., 1990; Wang H. J. et al., 1996).
13
В очаге воспаления макрофаги, обогащаются лизосомами, увеличиваются в размерах и отличаются от резидентных, также по компонентам кле- точной поверхности и способности секретировать свыше 60 веществ (Cohn Z. А., 1978; Karnovsky M. L., 1978). Клеточная мембрана приобретает неровные контуры, возрастает ее адгезивность. Клетки легче фиксируются и распластываются на чужеродной поверхности (Маянский Д. Н., Цырендоржиев Д. Д., 1990). В специфическом иммунном ответе макрофаги продуцируют цито-кины и «презентируют» чужеродный антигенный материал Т-лимфоцитам в доступной для распознавания форме, выставляя его на мембране с молекулами антигенов главного комплекса гистосовместимости класса И (Gordon S. et.. al., 1995).
Чувствительность макрофагов к различным воздействиям определяется наличием специфических рецепторов на плазматической мембране, среди которых CD 54, CD 58, участвующих в регуляции адгезивности, CD 64 - являющийся сигнальной молекулой к высвобождению ряда цитокинов и продуктов реактивного кислорода, играющий важную роль в осуществлении фагоцитарной функции, MSR scavenger рецептор - участвующий в эндоцитозе модифицированных липопротеинов, CDw 119 рецептор - необходимый для восприятия главного праймирующего цитокина у-интерферона, CDw 116 рецептор ростового фактора GM-CSF, служащий для дифференцировки и ак- тивации клеток, рецепторы интерлейкинов воспринимающие медиаторные воздействия, рецепторы CD 26, CD 13 - принимающие участие в межклеточном взаимодействии при воспалении, MMR, CD 14, CD 18, TOLL рецепторы - участвующие в захвате микроорганизмов (Gordon S. et al., 1995; Thomson A., 1992).
Функциональная активность макрофагов связана и с их способностью секретировать цитокины и факторы роста. Макрофаги секретируют как провоспалительные (ИЛ-1, ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-12, ФНО-а), так и противовос-
14
палительные цитокины (ИЛ-10) и TGF р. Посредством секреторной деятельности макрофаги участвуют в межклеточных взаимодействия. ^ ИЛ-1 опосредует развитие системного острофазного ответа, включаю-
щего лихорадку, нейтрофилию, активацию синтеза других цитокинов как макрофагами, так и другими клетками. Как правило, клетки не способны к спонтанному синтезу ИЛ-1, а отвечают его продукцией на инфекцию, действие микробных токсинов, воспалительных агентов, других цитокинов (Кетлинский С. А. и др., 1992; Dinarello С, Wolff S., 1993). Секретируемый макрофагами ИЛ-1 способствует активации Т-лимфоцитов при их ответе на антиген. Между провоспалительными цитокинами, для которых характерны синергидные эффекты, существуют достаточно сложные взаиморегули-• рующие отношения, в частности, ИЛ-6 ингибирует продукцию ИЛ-1 и
ФНО-ос, которые являются активными индукторами синтеза ИЛ 6 (Heinrich P.etal., 1990).
ИЛ-8 индуцирует хемотаксис гранулоцитов (нейтрофилов, базофилов, Т-лимфоцитов), имеющих к нему чувствительные рецепторы CDw 128; усиливает адгезию нейтрофилов к эндотелию и их дегрануляцию; индуцирует экспрессию адгезионных молекул (Вопа С, Bonilla F., 1996).
ИЛ-12 синтезируется макрофагами, в ответ на действие микробных компонентов. ИЛ-12 активирует продукцию у-ИФН Т-лимфоцитами.. По-*$ этому ИЛ-12 рассматривается как ключевой цитокин для усиления клеточ-
но-опосредованного иммунного ответа и инициации эффективной защиты против вирусов, бактерий, грибов и простейших. (Biron Ch., Gazzinelly R., 1995).
ФНО-а активирует гранулоциты, моноциты, макрофаги. Главными индукторами синтеза ФНО-а считаются ЛПС и другие компоненты микроорганизмов. Роль индукторов могут взять и другие цитокины: ИЛ-1, ИЛ-2, ИФН сс/р, GM-CSF (Thomson A., 1992). Продукция ФНО-а, в очаге воспа-^ ления, обеспечивает хемотаксис гранулоцитов и моноцитов в очаг, усиле-
15
ние фагоцитоза и микробицидности фагоцитов, усиленную их дегрануля-цию, продукцию и секрецию реактивных кислородных радикалов (суперок- сидных и нитроксидных), повышенную цитотоксичность фагоцитов. Т-лимфоциты в процессе активации приобретают усиленную экспрессию рецепторов для ИЛ-2 и ФНО-а. В синергизме с ИЛ-2, ФНО-а усиливает продукцию Т-клетками у-ИФН (Janeway Ch. A., Travers P., 1994). у-ИФН, продуцируемый Т-лимфоцитами, стимулирует макрофаги к уничтожению облигат-ных внутриклеточных паразитов.
ИЛ-10, как противовоспалительный основной цитокин, ингибирует функции самих моноцитов, макрофагов, продукцию ими супероксидных и нитроксидных радикалов, продукцию провоспалительных цитокинов (ИЛ-1, ИЛ-6, ИЛ-8, GM-CSF, G-CSF, ФНО-а, ИФН-а) разными клетками, что связано с его способностью угнетать продукцию ИЛ-12. Избыток ИЛ-10 ведет к снижению противоинфекционной защиты и развитию хронических инфекций (Thomson A., 1992). TGF р ингибирует активацию моноцитов, макрофагов, пролиферацию естественных киллеров и их цитотоксическую функцию, но активирует фибробласты и способствует процессам заживления ран. Продуцируя TGF р, макрофаги играют важную роль в репарации (Barnard J. A. et al., 1990; Kehrl J. et al., 1991).
Активированные макрофаги выделяют, кроме того, различные липиды, а также высокореакционноспособные кислородные свободные радикалы (Conrad R. Е., 1981; Gordon S. et al., 1997). Свободные радикалы участвуют в уничтожении патогенных микроорганизмов (Зенков Н. К. и др., 2001).
Подчеркнем, что макрофаги, синтезирующие и секретирующие биологически активные соединения, в том числе и АФК, могут выступать в качестве фактора определяющего эффективность воспалительного процесса. Поэтому определение функционального статуса макрофагов может рассматриваться как диагностический критерий оценки патологического процесса.
16
1.2. Апоптоз и некроз - две формы гибели клетки
•; В настоящее время изучение клеточной гибели становится одной из
бурно развивающихся областей биологических наук. Гибель клеток играет важную роль в формировании и функционировании многоклеточного организма. Патогенез многочисленных заболеваний связан с потерей нормального контроля организма над клеточной гибелью. Существуют два типа гибели - апоптоз и некроз.
Апоптоз - программируемая гибель клеток, есть механизм регулирования количественного содержания клеток в тканях и органах. Некроз - это патологическая форма клеточной смерти (Ярилин А. А., 1996; Проскуряков С. Я. и др., 2002). Основные морфологические признаки апоптоза - вакуолиза-ция и конденсация цитоплазмы и хроматина с последующей клеточной фрагментацией на апоптотические тельца, содержащие остатки ДНК и клеточные органеллы, при этом сохраняется целостность внешней мембраны и, поэтому, в отличие от некроза, апоптоз не сопровождается развитием воспаления (Самуилов В. Д. и др., 2000; Белушина Н. Н., 2001; HiguchiY., 2003). На биохимическом уровне апоптоз сопровождается угнетением включения в клетки глюкозы и нуклеозидов: снижением синтеза липидов, белков и АТФ; фрагментацией ДНК на 180 - 200 н. п. в результате активации эндонуклеаз
^ (Bursch W., 1992; Тронов В. А., 1999).
Некроз характеризуется разрывом цитоплазматической и внутриклеточных мембран, что приводит к разрушению органелл, высвобождению лизо-сомальных ферментов, разрывам ДНК случайным образом, кариолизу ядра и выходу содержимого цитоплазмы в межклеточное пространство (Проскуряков С. Я. и др., 2002). Форма клеточной гибели — по пути апоптоза или некроза — во многом определяется внутренним состоянием клеток: их типом, степенью дифференцировки, состоянием генома, стадией клеточного цикла,
^ внутриклеточной концентрацией НАДФ+ и АТФ. Снижение уровня НАДФ+
Список литературы
Цена, в рублях:
(при оплате в другой валюте, пересчет по курсу центрального банка на день оплаты)
1425
Скачать бесплатно
24809.doc
Найти готовую работу
ЗАКАЗАТЬ
Обратная
связь:
Связаться
Вход для партнеров
Регистрация
Восстановить доступ
Материал для курсовых и дипломных работ
29.04.24
Результаты оценки психологических детерминант гражданской идентичности учащихся старших классов
29.04.24
Программа формирования гражданской идентичности старшеклассников
29.04.24
Психологические основания для разработки программы формирования гражданской идентичности старшеклассников
Архив материала для курсовых и дипломных работ
Ссылки:
Счетчики:
© 2006-2022. Все права защищены.
Выполнение уникальных качественных работ - от эссе и реферата до диссертации. Заказ готовых, сдававшихся ранее работ.