У нас уже 176407 рефератов, курсовых и дипломных работ
Заказать диплом, курсовую, диссертацию


Быстрый переход к готовым работам

Мнение посетителей:

Понравилось
Не понравилось





Книга жалоб
и предложений

 





Название Влияние экзогенного мелатонина на липиды раневого поля кожи крыс в процессе регенерации
Количество страниц 107
ВУЗ МГИУ
Год сдачи 2010
Бесплатно Скачать 24783.doc 
Содержание Содержание
I. ВВЕДЕНИЕ...6

II. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ...10

2.1. Характеристика липидов кожи...10

2.2. Регенерация кожи и процесс формирования грануляционно-фиброзной ткани...15

2.2.1. Морфологические характеристики грануляционно-

фиброзной ткани...15

2.2.2. Некоторые биохимические особенности развивающейся грануляционно-фиброзной ткани...21

2.2.3. Влияние различных гормонов на процесс репаративной регенерации кожи...27

2.3. Биологическое действие мелатонина...30

2.3.1. Структура, синтез и содержание мелатонина

в тканях...30

2.3.2. Биологические эффекты мелатонина...35

2.3.3. Влияние мелатонина на репаративные процессы

в коже...40

III. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ...44

3.1. Объекты исследований...44

3.2. Организация исследований...44

3.2.1. Модельные системы для изучения процесса

регенерации кожи...44

3.2.2. Изучение влияния мелатонина на липиды

раневого поля кожи крыс...45

3.3. Методы анализа липидов...47

3.3.1. Получение и очистка общего липидного экстракта...47

3.3.2. Анализ общих липидов и их отдельных фракций...47

3.3.3. Микрометоды определения общих фосфолипидов

и их фракций...51

3.4. Статистическая обработка результатов исследований...54

IV. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ...55

4.1. Изменения содержания общих липидов, общих фосфолипидов и их фракций в грануляционно-фиброзной, рубцовой тканях, струпе и прираневых участках кожи крыс в процессе регенерации...55

4.2. Влияние подкожного введения мелатонина на липидные показатели грануляционно-фиброзной, рубцовой тканей, струпа и прираневых участков кожи

крыс в процессе регенерации...61

4.3. Влияние внутрибрюшинных инъекций мелатонина на липидный состав грануляционно-фиброзной ткани крыс...80

4.4. Изменения липидов грануляционно-фиброзной

ткани крыс в условиях местного нанесения мелатонина...84

V. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ...90

5.1. Характеристика изменений липидных показателей раневого поля крыс при нормальном заживлении кожных ран...90

5.2. Сравнительная характеристика влияния длительного предварительного подкожного введения разных доз мелатонина на липиды раневого поля кожи крыс...93

5.3. Особенности действия однократного и многодневного введения мелатонина на липидные показатели грануляционно-фиброзной ткани крыс...98

5.4. Особенности воздействия местного применения мелатонина на липиды грануляционно-фиброзной ткани крыс...99

5.5. Сравнительная характеристика влияния разных способов и режимов введения мелатонина на липиды раневого

поля кожи крыс в ходе регенерации...101

VI. ВЫВОДЫ...104

VII. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ...107

Введение



СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ГАГ - гликозаминогликаны ПОЛ

ГЛФ - глицерофосфаты

ГФ ткань - грануляционно- ПГФ

фиброзная ткань РНК

ДГ - диглицериды СЖК

ДНК - дезоксирибонуклеиновая СФМ

кислота ТГ

ЖК - жирные кислоты ФИ

ЛФЛ - лизофосфолипиды ФК -

МТ -мелатонин ФЛ -

НАДФН - никотинамидаденин- ФР -

динуклеотидфосфат ФС -

восстановленный ФХ -

ОЛ - общие липиды ФЭА -

ОФЛ - общие фосфолнпиды X -

ЭХ -

- перекисное окисление липидов

- полиглицерофосфаты

- рибонуклеиновая кислота

- свободные жирные кислоты

- сфингомиелины

- триглицериды

- фосфатидилинозиты

- фосфатидные кислоты

- фосфолипиды

- физиологический раствор

- фосфатидилсерины

- фосфатидилхолины

- фосфатидилэтаноламины

- холестерин эфиры холестерина

I. ВВЕДЕНИЕ

к:

Актуальность проблемы. Регенерация кожных ран является сложным

многоэтапным процессом, сопровождающимся разнообразными изменениями клеточных компонентов раневого поля (грануляционно-фиброзной, рубцовой, тканей, струпа, прираневых участков кожи), существенными биохимическими перестройками белкового, углеводного, липидного и минерального обменов в нем [14,55,79,102]. Проведены многочисленные исследования, посвященные проблемам регуляции раневого процесса с помощью различных физико-химических факторов, лекарственных и гормональных препаратов [22,104,125,155,183].

В настоящее время большее значение приобретает изучение влияния на заживление ран эпифизарного гормона мелатонина в связи с его использованием в лечении разнообразных, в том числе кожных заболеваний [1,6,70,73,76]. Известно, что мелатонин проявляет широкий спектр действия. Этот гормон считается модучятором иммунной и эндокринной систем [5,89,90], обладает выраженными антиоксидантными свойствами [84,176,190,193], влияет на пролиферацию клеток [87,122,135,145], участвует в регуляции метаболизма белков, липидов и углеводов разных органов и

^ тканей [123,186,194]. Перечисленные функции мелатонина позволяют

предполагать как прямые, так и опосредованные механизмы его влияния на процессы репарации. На клеточном уровне это может выражаться в изменении динамики энергетического и пластического обменов компонентов раневого поля. Установлено, что экзогенный мелатонин изменяет спектр солерастворимых белков и фракционный состав гликозаминогликанов грануляционно-фиброзной ткани [50]. Данные, касающиеся влияния мелатонина на превращения липидов раневого поля, в настоящее время

^ крайне ограничены. Вместе с тем, подобные исследования представляют

интерес как с точки зрения выявления новых аспектов действия гормона в

организме, так и в плане разработки общей проблемы регуляции восстановительных процессов в различных тканях.

Целью исследования явилось изучение изменений липидов раневого поля кожи крыс при нормальном заживлении и в присутствии экзогенного мелатонина.

В задачи исследования входило:

1. Выявить изменения липидного состава раневого поля кожи крыс при нормальном заживлении.

2. Исследовать влияние длительного предварительного подкожного введения мелатонина на липиды раневого поля кожи крыс в динамике заживления.

3. Оценить действие однократных и многодневных внутрибрюшинных инъекций мелатонина на липидные параметры грануляционно-фиброзной ткани крыс в процессе регенерации.

4. Изучить эффект местного нанесения мелатонина на липидные показатели грануляционно-фиброзной ткани крыс в условиях регенерации.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту.

1. Процесс регенерации сопровождается значительными изменениями липидных показателей раневого поля кожи крыс: грануляционно-фиброзной, рубцовой тканей, струпа, прираневых участков кожи. В грануляционно-фиброзной ткани крыс к 5 дню регенерации происходит накопление липидов, с их последующим гидролитическим расщеплением к 8 дню. Превращение данной ткани в рубцовую сопровождается увеличением количества липидов, с активацией распада фосфолипидов в струпе и прираневых участках кожи.

2. Длительное предварительное подкожное введение мелатонина вызывает отчетливые дозозависимые изменения липидов раневого поля кожи крыс: в дозе 0,3 мг/кг он препятствует, в дозе 4 мг/кг - способствует увеличению количества липидов в грануляционно-фиброзной ткани крыс на 5 день регенерации. К 8 дню преобладают реакции гидролиза липидов; к 23 дню

заживления наблюдается аккумулирование липидов. Под влиянием мелатонина в дозах 0,3; 1 и 4 мг/кг в струпе крыс усиливаются процессы гидролитического расщепления липидов, в прираневых участках кожи обнаруживается накопление липидов и фосфолипидов.

3. Многодневные инъекции мелатонина ограничивают возрастания липидного и фосфолипидного компонентов в грануляционно-фиброзной ткани крыс на 5 и 8 дни регенерации.

4. Местное нанесение мелатонина на раневую область стимулирует накопление фосфолипидов в грануляционно-фиброзной ткани крыс на ранних и более поздних сроках регенерации.

Научная новизна. В работе представлены новые данные о липидном составе раневого поля кожи крыс и динамике его изменений в ходе нормального заживления кожных ран. Выявлены изменения липидных показателей грануляционно-фиброзной ткани, струпа и прираневых участков кожи на 5, 8 дни регенерации, рубцовой ткани на 23 день заживления под влиянием предварительного подкожного введения разных доз мелатонина. Проведено сравнительное изучение изменений липидных и фосфолипидных параметров грануляционно-фиброзной ткани в условиях внутрибрюшинного (однократного и многодневного) и местного применения разных доз мелатонина в процессе регенерации. Проведенные нами исследования установили участие мелатонина в регуляции уровня липидов в раневом поле кожи крыс. Выявлено неоднозначное, в ряде случаев разнонаправленное влияние мелатонина, а также дозозависимый характер действия этого гормона в отношении липидов раневого поля кожи крыс.

Теоретическое и практическое значение. Полученные данные вносят определенный вклад в понимание роли липидов в процессе заживления кожных ран. Результаты проведенных исследований дают возможность более полного понимания молекулярно-биохимических механизмов влияния мелатонина на липидный состав грануляционно-фиброзной, рубцовой тканей,

струпа и прираневых участков кожи крыс, дополняют и расширяют представления о роли эпифизарного гормона в регуляции липидного обмена в исследуемых тканях в динамике регенерации. Представленные результаты открывают возможность поиска новых путей предупреждения негативных последствий применения мелатонина в восстановление повреждений кожи, выполнение ею разнообразных функций. Представленные данные необходимо учитывать при разработке рекомендаций для клинических испытаний мелатонина в практике гастроэнтерологии, дерматологии, в косметологии и других областях медицины.

Материалы работы используются на кафедре биохимии и биотехнологии ТвГУ при подготовке курсовых и дипломных работ, а также в курсах «Молекулярная патология», «Биохимия гормонов».

Апробация работы. Материалы диссертационного исследования докладывались и обсуждались на VII, VIII, XII Областной научно-технической конференции молодых ученых «Химия и химическая технология», Тверь, 2000, 2001, 2005; научной конференции аспирантов и студентов, Тверь, 2001; I Международном конгрессе «Новые медицинские технологии», СПб, 2001; Межвузовской научной конференции молодых ученых, Тверь, 2001; 5-ой, 6-ой, 7-ой Международной Пущинской школе- конференции молодых ученых «Биология - наука 21 го века», Пущино, 2001, 2002, 2003.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 19 работ.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 126 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части и методов исследований, результатов собственных исследований, обсуждения результатов исследований, выводов и списка литературы, включающего 201 источник, из которых 87 иностранных. Работа иллюстрирована 15 таблицами, 11 рисунками и схемами.

10

II. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1. Характеристика липидов кожи

Липиды относятся к важнейшим биохимическим составляющим кожи и наряду с другими компонентами определяют ее структурные и функциональные особенности.

Исследованиями ряда авторов было показано, что в коже содержатся все основные группы липидов, присутствующие и в других тканях животных [53,97,99,101]. Среди липидов кожи можно выделить 6 основных групп: глицерофосфолипиды, сфинголипиды, стерины и стериды, гликолипиды, нейтральные липиды и фракцию восстановленных соединений. Основными As представителями перечисленных групп являются:

1. Глицерофосфолипиды: фосфатидилхолины, фосфатидилэтаноламины, фосфатидилсерины, фосфатидилинозиты, фосфатидные кислоты, ацетальфосфолипиды (плазмалогены), полиглицерофосфатиды (кардиолипины), фосфатидилглицерины.

2. Сфинголипиды: сфингомиелины, церамиды.

3. Стерины, стериды: холестерин, его окисленные и восстановленные производные, эфиры холестерина, ланостерин, десмостерин и др.

4. Гликолипиды: цереброзиды, ганглиозиды.

5. Нейтральные липиды: моно-, ди- и триацилглицериды, а также жирные кислоты и др.

6. Фракция восстановленных соединений: сквален, воска, парафины.

Содержание общих липидов в коже животных и человека составляет

1800-3000 мг % (8-20 % сухого веса). Различия могут быть обусловлены как

,. возрастными, половыми особенностями [53], временем года [181], так и

применением различных методов выделения, разделения, очистки,

количественного определения липидов.

11

Липиды кожи характеризуются не только уникальным составом, но и многообразием выполняемых ими функций, которые представлены в табл. 1.

Таблица 1

Основные функции липидов кожи

Класс липидов Функции

Глицеро-фосфолипиды Принимают участие: - в формировании мембранных структур [11,104], - в процессах воспаления [19], - в процессах ороговения [21], - в трансмембранной передаче сигналов [97], - в регуляции активности липидзависимых ферментов [182], - в повреждении мембран (перекиси липидов) [11,114], - в биосинтетической активности фибробластов ГФ ткани [59], - в процессе посттравматической регенерации [88,61].

Сфинголипиды 1. Участвуют в формировании мембранных структур [11,104]. 2. Необходимы для создания кожной проницаемости (церамиды) [133]. 3. Способствуют процессу дифференцирования кератиноцитов (церамиды) [21,133]. 4. Регулируют метаболизм X в фибробластах [133]. 5. Выполняют мессенджерные функции [133].

Стерины 1. Принимают участие в структурной организации мембран, придают липидному бислою определенную упорядоченность и плотность (X и ЭХ) [11]. 2. Принимают участие в контроле синтеза СФМ (X) [150]. 3. Участвуют в процессах кератинизации [53]. 4. Являются модуляторами активности мембраносвязанных ферментов [132]. 5. Необходимы для функционирования кожной проницаемости [132,133]. 6. Осуществляют когезию клеток рогового слоя (сульфат X) [53]. 7. Участвуют, наряду с ФЛ, в биосинтетической активности фибробластов [133].

12

Продолжение табл. 1

Гликолипиды Регулируют: - структурную организацию мембран [И], - процесс дифференциации кератиноцитов [21], - процесс рецепции гормонов и опиатов [11], - формирование кожной проницаемости [133].

Нейтральные липиды 1. Используются в качестве доноров ЖК в липидном обмене (ДГ,ТГ)[11]. 2. Обеспечивают энергетические процессы (ЖК) [53]. 3. Участвуют в реакциях биотрансформации, рециклинга и метаболических взаимоотношений различных классов липидов (общий пул СЖК) [17,29,102]. 4. Осуществляют синтез простагландинов (непредельные ЖК) [33,88]. 5. Участвуют в качестве медиаторов в процессах дифференциации, воспаления [91]. 6. Являются вторичными мессенджерами в передаче гормональных сигналов (ДГ) [11]. 7. Регулируют физико-химические параметры мембранных структур и активность ряда мембраносвязанных ферментов [11,13,164]. 8. Поддерживают кожную проницаемость [132,133]. 9. Принимают участие в микроциркуляции, пролиферации, развитии ГФ ткани и ее преобразовании в рубцовую ткань [61,88].

Неомыляемые восстановленные липиды Принимают участие в антиоксидантной защите организма (сквален) и поддержании кожной проницаемости [132,147].

С помощью различных методов исследования липидного спектра кожи человека (электронно-микроскопических, гистохимических) выявлено, что липиды в коже распределены неравномерно. Эти соединения в различном составе и количестве находят в дерме, стенках сосудов кожи, секрете сальных желез (сквален, сфинголипиды), а также в разных слоях эпидермиса (главным образом установлено наличие ФХ, ФЭА, ФС, СФМ, свободных и этерифицированных стеринов, стеролов, сквалена, жирных кислот) как в клетках (ядро, митохондрии), так и вне клеток [43,53,94,101]. Необходимо отметить, что в роговом и блестящем слоях эпидермиса человека липидов меньше по сравнению с остальными слоями (в основном церамиды в связанном с белками состоянии) [133]. В зернистом слое обнаружено высокое

13

содержание жирных кислот [53], шиловидный слой богат свободным холестерином [65]. Следует отметить, что в роговой слой липиды могут попадать с секретом сальных и потовых желез, в то же время высказывается мнение о внутриклеточном происхождении липидов рогового слоя [53].

По данным П.В. Сергеева (1993) (табл. 2), в коже крыс наибольшее количество приходится на фракции ФХ, ФЭА, ФИ. Необходимо отметить, что в составе фосфолипидов обнаружено высокое содержание непредельных и разветвленных жирных кислот [97].

Таблица 2 Фосфолипиды кожи крыс [97]

Фракции фосфолипидов Содержание, в % от суммы фракций

Фосфатидилглицерины 1,75

Фосфатидилхолины 31,57

Фосфатидилинозиты 14,8

Фосфатидилэтаноламины 17,40

Фосфатидные кислоты 2,95

A.M. Чернух (1982) показал высокое содержание ФЛ в базальном и гранулярном слоях кожи человека, а не в роговом. Исключение составляет кожа ладоней, подошв, псориатических бляшек, где высокое содержание ФЛ в роговом слое обусловлено снижением распада клеток и увеличением синтеза липидов [53].

Кожа человека отличается высоким разнообразием спектра СЖК, которое особенно характерно для верхних слоев эпидермиса. Здесь одновременно с предельными высшими ЖК содержатся и другие кислоты, такие как муравьиная, уксусная, пропионовая, масляная и другие. В коже найдено достаточно много конечных и промежуточных продуктов биосинтеза ЖК, что свидетельствует об образовании их in situ [53].

14

В настоящее время активно изучаются процессы обмена липидов в коже, что связано не только с теоретической, но и важной практической значимостью данных исследовании (косметология, диагностика и лечение кожных заболеваний, болезней, связанных с нарушением липидного обмена, трансплантацией кожной ткани, восстановлением поврежденных тканевых структур кожи и др.) [10,14,16,35,79,81].

Установлено, что в коже человека для поддержания количества СЖК на постоянном уровне большое значение имеет процесс поступления этих соединений с кровью в результате функционирования транспортных механизмов. Жирные кислоты кожи участвуют в синтезе ФЛ, ТГ, ЭХ. В процессе биосинтеза глицеридов используются ЖК, синтезируемые как de novo, так и освобождающиеся в процессе липолиза в жировой ткани, а также механизмах рециклинга [53].

В базальном слое и сальных железах наблюдается высокая активность липогенеза, однако процессы распада липидов происходят в верхних слоях эпидермиса. При дифференциации кератиноцитов наблюдается гидролитическое расщепление ФЛ и гликолипидов под действием как внутриклеточных, так и экстрацеллюлярных фосфолипаз, гликоцереброзидаз. Синтезирующиеся СЖК участвуют в накоплении ЭХ и ТГ [53].

у- Фосфолипиды клеточных структур кожи могут образовываться из ФК,

ЖК и ДГ, при этом ДГ используется и для синтеза ТГ. Отмечено, что ФЛ мембранных структур кожи способны обмениваться отдельными компонентами in situ, в частности, азотистыми основаниями. Механизмы вышеуказанных процессов в коже идентичны таковым и в других органах и тканях [53]. В коже обнаружены основные группы ферментов, участвующие в деградации фосфолипидов (фосфолипазы А], А2, В, С, D, монофосфоэстеразы, лизофосфолипазы, инозитолфосфатазы), СФМ (сфингомиелиназы, * церамидазы) [173].

15

При анализе возможных путей биосинтеза и метаболических превращений различных групп ФЛ и нейтральных липидов отмечено, что в их синтезе принимают участие как общие предшественники (глицерофосфат, фосфатидные кислоты, диглицериды), так и соединения, переходящие из одних групп липидов в другие (жирные кислоты, азотистые основания) [29].

В обзоре литературы нами не рассмотрены пути обмена многих восстановленных липидов. Это связано с тем, что экспериментальная часть работы посвящена в основном исследованию изменений разных классов ОЛ, ФЛ, нейтральных липидов, а также холестерина и его эфиров.

Таким образом, интенсивность процессов синтеза и распада липидов в коже, сальных железах, регулирующееся различными гормонами [97], витаминами и зависящее от возрастных особенностей [53], состояния кожной проницаемости [132], позволяет им участвовать в физиологических и патологических процессах в коже и организма в целом.

2.2. Регенерация кожи и процесс формирования грануляционно-

фиброзной ткани

2.2.1. Морфологические характеристики грануляционно-фиброзной ткани

В работах отечественных и зарубежных ученых показано, что при повреждении кожи происходит многоэтапный процесс ее заживления, которому посвящено большое число экспериментальных и клинических исследований [24,39,47,80,165]. Весь процесс заживления, частью которого является развитие грануляционно-фиброзной ткани, представляет собой динамическую саморегулирующуюся систему: повреждение - медиаторная и микроциркуляторная реакции - экссудация и миграция клеток из сосудов -очищение от продуктов распада - пролиферация фибробластов и рост сосудов

16

- фибриллогенез коллагена - созревание и фиброзное превращение ГФ ткани -реорганизация и инволюция рубца [18,22,37,88].

Совокупность сложных биологических и биохимических изменений в ране, завершающихся ее заживлением, называют раневым процессом, более или менее четко разделенным на фазы в соответствии с функциональными и морфологическими изменениями, протекающими в самой ране и окружающих ее тканях [26,77,107]. Большинство авторов [39,47,88,107,165] выделяют следующие фазы раневого процесса: выход клеток крови в рану, воспаление, формирование ГФ, ее сокращение, последующая трансформация в рубец и реорганизация рубца. Продолжительность течения каждой фазы зависит от характера и величины повреждения, наличия микроорганизмов и др. (рис. 1).

Формирование ГФ ткани

3-4 день 4-6 день

Образование рубца

Повреждение------> Воспаление —Ў—> Пролиферация —Ў—> Заживление

1-3 часа

3-5 дней 5-7 дней

10-14 дней 15-20 дней

более 23 дней

Реорганизания рубыа

Рис. 1. Продолжительность течения процесса заживления

кожных ран [76,98].

В настоящее время представления о течении регенерационного процесса основаны на учении о воспалении. Воспаление включает много сложных, следующих друг за другом изменений микроциркуляторного русла,

17

свертывающей и противосвертывающей системы крови, клеточных элементов соединительной ткани, которые направлены на изоляцию и устранение повреждающего фактора, восстановление или замещение поврежденных тканей. Воспаление, обусловленное присутствием макрофагов, является необходимым звеном процесса заживления. Удаление их из раны в эксперименте тормозит развитие грануляционной ткани и приводит к формированию длительно незаживающих ран [9,82,93,107], Таким образом, фаза воспаления представляет собой важную совокупность защитных физиолого-биохимических реакций, определяющих дальнейший ход процесса заживления ран [22,91,107,111].

Существенное значение имеют изменения, наступающие в микрососудистом русле [88,107,111]. В сосудах микроциркуляции при повреждении кожи отмечают стаз эритроцитов, лимфостаз, повышенную проницаемость для лейкоцитов, эритроцитов и плазмы, спазм периферических сосудов с последующей вазодилятацией, что в конечном итоге приводит к реактивной гиперемии и развитию воспалительного отека [76,78]. Расширение сосудистой сети в окружности раны, явления экссудации и отека, последующая лейкоцитарная-инфильтрация, клеточные реакции моноядерной фагоцитирующей системы направлены на очищение раны от продуктов травматического распада. Спустя 4-6 часов после нанесения раны развивается клеточная реакция, заключающаяся в инфильтрации травмированных тканей лейкоцитами. Первыми в ране появляются и преобладают полиморфноядерные лейкоциты, затем увеличивается содержание мононуклеарных элементов и, наконец, фибробластов [44,107].

Сущностью следующего этапа раневого процесса — фазы пролиферации-является заполнение раневого дефекта регенератом и его эпителизация, которому предшествует гибель клеток и лизис некротизированных тканей. Пролиферативная функция соединительной ткани тесно связана с воспалением и наличием фибробластов, что являет собой начало истинно

Список литературы
Цена, в рублях:

(при оплате в другой валюте, пересчет по курсу центрального банка на день оплаты)		 1425
Скачать бесплатно 24783.doc 





Найти готовую работу


ЗАКАЗАТЬ

Обратная связь:


Связаться

Доставка любой диссертации из России и Украины

Вход для партнеров

Регистрация

Восстановить доступ

Материал для курсовых и дипломных работ


Ссылки:

Выполнение и продажа диссертаций, бесплатный каталог статей и авторефератов

Счетчики:

Besucherzahler
счетчик посещений

© 2006-2022. Все права защищены.
Выполнение уникальных качественных работ - от эссе и реферата до диссертации. Заказ готовых, сдававшихся ранее работ.